Предности и недостаци вишефотонске ласерске скенирајуће микроскопије (МЛСМ)
Вишефотонска ласерска скенирајућа микроскопија је експериментална метода заснована на технологији ласерске скенирајуће микроскопије, која пружа боље могућности оптичког сечења за тродимензионално посматрање. Метода вишефотонске ексцитације флуоресценције користи црвену светлост дугих таласа или блиску инфрацрвену светлост за прикупљање флуоресцентних слика високе резолуције узорака, што узрокује минимално оштећење живих примерака. Због тога је погодан за снимање живих ћелија, посебно дебелих живих ткива као што су делови мозга, ембриони, итд. Студије слика целих органа или чак целих тела.
Предности су следеће:
1. Користите црвено или инфрацрвено светло за узбуђење, а расипање светлости је мало (расипање малих честица је обрнуто пропорционално четвртом степену таласне дужине).
2. Није потребна рупица и може се прикупити више расејаних фотона са попречног пресека слике.
3. Рупа не може да разликује расуте фотоне емитоване из дефокусиране области или области фокуса, а однос сигнал-шум вишефотонског снимања у дубоким слојевима је добар.
4. Ултраљубичасто или видљиво светло које се користи за једнофотонско побуђивање лако се апсорбује и пригушује од стране узорка пре него што сноп достигне жижну раван, и тешко је побудити дубоке слојеве.
5. У погледу посматрања биолошким микроскопом, прво се води рачуна да се не оштети активно стање самог организма и да се одржи проток воде, концентрација јона, кисеоника и хранљивих материја. У случају посматрања светлости, и топлота и енергија фотона морају остати унутар количине зрачења и светлосне енергије да ћелије неће бити оштећене.
6. Мултифотонска микроскопија такође има много предности. На пример, у погледу тродимензионалне резолуције, продора у дубину, ефикасности расејања, позадинског светла, односа сигнал-шум, контроле, итд., постоје трансцендентне карактеристике које претходни ласерски микроскопи нису имали или нису могли да парирају.
Вишефотонска конфокална ласерска скенирајућа микроскопија проширена је на различита поља истраживања и примене. Може да спроводи тродимензионално недеструктивно посматрање узорака у њиховом природном стању и може да побољша резолуцију и однос сигнал-шум система. Коришћење материјала за побуђивање са више фотона. Промене својстава такође могу да реализују тродимензионално складиштење података о висини и тродимензионалну микро машинску обраду у било ком правцу, што има велику примену. Верује се да ће даљим развојем машина, материјала, ласерске технологије итд. везаних за мултифотонску конфокалну микроскопију, више фотонске конфокалне ласерске скенирајуће микроскопије добити већи развој и ширу примену.
Недостаци су следећи:
1. Може само да слика флуоресценцију.
2. Ако узорак садржи хромофоре који могу да апсорбују ексцитационо светло, као што су пигменти, узорак може бити оштећен топлотом.
3. Резолуција је мало смањена. Иако се може побољшати коришћењем конфокалних рупа у исто време, доћи ће до губитка сигнала.
4. Ограничени скупим ултрабрзим ласерима, цена вишефотонских микроскопа за скенирање је релативно висока.
