Детаљно описати кораке избора и методе флуоресцентних сонди за конфокалну микроскопију
У експериментима са конфокалним микроскопима, неки експериментални индикатори се могу детектовати коришћењем аутофлуоресценције самог узорка или егзогених супстанци, али већина супстанци које се тестирају немају мерљиву флуоресценцију и морају бити обележене флуоресцентним сондама. Има мерљив флуоресцентни сигнал. Дакле, како одабрати флуоресцентне сонде за конфокалну микроскопију?
1. Одредити индикаторе који ће се тестирати према сврси експеримента
Када се одреди индекс детекције, одређује се и опсег избора флуоресцентних сонди. Види се да је избор флуоресцентне сонде која ће се користити у експерименту одређен сврхом експеримента. На пример, ако је сврха експеримента да се проуче промене јона калцијума у кардиомиоцитима када дође до атријалне фибрилације, може се утврдити да су супстанца која се тестира јони калцијума у кардиомиоцитима, а опсег селекције флуоресцентних сонди је ограничен на сонде калцијумових јона које могу означити живе ћелије. Неедле.
2. Одредите опсег доступних флуоресцентних сонди
За нове експерименталне супстанце или индикаторе, ако сврха експеримента није истраживање нових флуоресцентних сонди, можете изабрати да примените зреле сонде и методе обележавања. Тип или опсег флуоресцентних сонди које могу означити супстанцу која се тестира може се одредити претраживањем ауторитативне литературе или каталога производа познатих компанија за реагенсе у земљи и иностранству.
3. Испитати да ли карактеристике флуоресцентне сонде испуњавају услове за припрему флуоресцентних узорака
Карактеристике флуоресцентних сонди директно утичу на обележавање узорака и експерименталне резултате. Стога, пре одабира флуоресцентних сонди и обележавања узорака у експерименту, неопходно је у потпуности разумети њихове карактеристике флуоресценције. Карактеристике флуоресцентних сонди које треба истражити укључују:
1. Реакционе карактеристике светлосних сонди и узорака
2. Осетљивост и интензитет флуоресценције флуоресцентних сонди
3. Спектрална својства узорака обележених флуоресцентним сондама
4. Стабилност флуоресценције
5. Интеракција између вишеструке флуоресценције у узорку
