Одређивање микробне популације – метода директног микроскопског бројања!
И. Захтеви за сврху
1, Да разјаснимо принцип бројања хематокритних плоча.
2, Савладајте методу бројања микроба помоћу хематокритне плоче.
ИИ. Основни принципи
Метода директног бројања микроскопа је мала количина суспензије узорка која се тестира на посебном предмету са дефинисаном површином и запремином (познатом и као бактериолошки бројач), у микроскопу директно бројањем једноставном, брзом, интуитивном методом. Тренутно, домаћи и страни најчешће коришћени бактериолошки бројачи су: плоча за бројање крвних зрнаца, бактериолошки бројачи Петерофф-Хаусер и бактериолошки бројачи Хавкслеи, итд., који се могу користити за квасац, бактерије, споре плесни и друге суспензије бројања, основни принцип је исти. Последња два типа бројача имају укупну запремину од 0.02мм3 након стављања покровног стакала, а растојање између покровног стакала и носеће кришке је само 0,02мм, тако да су мање ћелије као нпр. бактерије се могу посматрати и бројати помоћу објектива за урањање у уље. Поред употребе ових бројача, постоји и метод процене односа површине размаза и површине видног поља посматраног директно под микроскопом, који се углавном користи за бактериолошко испитивање крављег млека. Предности методе директног бројања микроскопом су интуитивне, брзе и једноставне за руковање. Међутим, недостатак ове методе је што је резултат обично збир мртвих и живих организама. Постоје неке методе за превазилажење овог недостатка, као што је комбинација културе микрокомора обојене живим бактеријама (кратко време) и додавање инхибитора цитокинезе да би се постигла сврха бројања само живих организама.
Кораци операције
1, Припрема бактеријске суспензије
Стерилним физиолошким раствором направите бактеријску суспензију пивског квасца одговарајуће концентрације.
2, Комора за бројање огледала
Пре додавања узорака, прво треба прегледати комору за бројање плоче за бројање. Ако има прљавштине, треба је очистити и осушити пре бројања.
3, Додавање узорака
Очистите и осушите плочу за бројање крвних зрнаца прекривену покровним стаклом, а затим користите стерилну капиларну бирету да отресете суспензију пивског квасца са ивице покровног стакла и испустите малу кап, тако да бактеријска течност дуж процепа капиларним продором у комора за бројање аутоматски, генерално комора за бројање може бити напуњена бактеријском течношћу. Приликом узимања узорака, раствор бактерије треба прво добро промућкати; при додавању узорака комора за бројање не би требало да има мехуриће ваздуха.
4, бројање микроскопом
Након додавања узорка, оставите га да одстоји 5 минута, а затим ставите плочу за бројање крвних зрнаца на степен носача микроскопа, прво пронађите локацију коморе за бројање са малим увећањем, а затим је промените на велико увећање за бројање. Подесите интензитет светлости микроскопа на одговарајући начин, јер микроскоп са рефлектором такође треба обратити пажњу на то да светлост не би требало да буде нагнута на једну страну, у супротном видно поље није лако захватити јасну линију решетке коморе за бројање, или види само вертикалну линију или само хоризонталну линију. Ако се открије да је бактеријска течност сувише густа или сувише ретка пре бројања, потребно је поново подесити разблаживање пре бројања. Општи захтеви за разблаживање узорка од око 5 до 10 бактерија у свакој ћелији су одговарајући. За сваку комору за бројање, организми у 5 средњих преграда (4 угла и један средњи одељак у центру) се бирају за бројање. Организми који се налазе на линијама мреже обично се броје само на горњој и десној линији. У случају пупања квасца, када тело пупања достигне половину величине матичне ћелије, рачуна се као два организма. Бројање узорка из две коморе за бројање у просечној вредности да би се израчунао садржај бактерија у узорку.
5. Чишћење хематокритне плоче
Након употребе, исперите плочу за бројање крвних зрнаца водом под славином, немојте користити тврде предмете за прање и четкање, сушите је сами или користите фен да је осушите након прања. Микроскопски прегледајте плочу да видите да ли у сваком одељку има остатака организама или других талога. Ако није чист, прање се мора понављати док се не очисти.
