Одређивање броја микроорганизама-Микроскопска метода директног бројања!
Раст популације бактерија се манифестује повећањем броја ћелија или повећањем ћелијског материјала. Методе за одређивање броја ћелија укључују директно микроскопско пребројавање, број плоча, процену замућености спектрофотометром, највероватнији број МПН и мембранску филтрацију. (мембранска филтрација) итд. Методе за мерење ћелијских супстанци обухватају одређивање суве масе ћелије, одређивање одређених ћелијских компоненти као што су садржај азота, РНК и ДНК, и одређивање продуката метаболита. Укратко, постоји много метода за мерење микробног раста, од којих свака има своје предности и мане. Методу треба изабрати према специфичним захтевима рада. Овај експеримент углавном уводи микроскопску методу директног бројања која се обично користи у производњи и научноистраживачком раду.
1. Захтеви за намену
1. Појасните принцип бројања помоћу табле за бројање крвних зрнаца.
2. Овладати методом бројања микроорганизама помоћу табле за бројање крвних зрнаца.
2. Основни принципи
Метода директног бројања микроскопом је једноставна, брза и интуитивна метода која ставља малу количину суспензије узорка за тестирање на посебан предмет са одређеном површином и запремином (који се назива и бактериометар) и пребројава директно под микроскопом. Методе. Тренутно се најчешће користе бактериометри у земљи и иностранству: хемоцитометар, Петерофф-Хаусер бактериометар, Хавкслеи бактериометар итд. Сви се могу користити за бројање квасца, бактерија, спора плесни и других суспензија, а основни принципи су исти. Последња два бројача бактерија имају укупну запремину од 0.02мм3 након што су прекривени покривним стаклом, а растојање између покривног стакла и стакала је само 0,02мм. Због тога се објектив са урањањем у уље може користити за посматрање и откривање мањих ћелија као што су бактерије. цоунт. Поред употребе ових бактериометара, постоји и метода процене која директно посматра однос површине размаза и површине видног поља под микроскопом. Ова метода се углавном користи за бактериолошко испитивање млека. Предности методе директног бројања микроскопа су да је интуитиван, брз и лак за руковање. Међутим, недостатак ове методе је што је измерени резултат обично збир мртвих и живих бактерија. Тренутно постоје неке методе за превазилажење овог недостатка, као што је комбиновање живих бактерија бојење микрокоморне културе (кратко време) и додавање инхибитора ћелијске деобе да би се постигла сврха бројања само одрживих бактерија.
Овај експеримент користи хемоцитометар као пример за спровођење директног бројања под микроскопом. За употребу друга два бактериометра, погледајте упутства сваког произвођача. Директно бројање под микроскопом помоћу хемоцитометра је уобичајена метода бројања микроба. Табла за бројање је посебан клизач са четири жлеба који формирају три платформе; шира платформа у средини подељена је на две половине кратким хоризонталним жлебом, а са сваке стране платформе је мрежаста мрежа. Свака квадратна мрежа је подељена на девет великих квадрата, а велики квадрат у средини је соба за бројање. Структура плоче за бројање крвних зрнаца приказана је на слици {{0}}. Генерално постоје две спецификације за скалу коморе за бројање. Један је велики квадрат подељен на 25 средњих квадрата, а сваки средњи квадрат је подељен на 16 малих квадрата (слика 15-2); други је велики трг. Квадратна мрежа је подељена на 16 средњих квадрата, а сваки средњи квадрат је подељен на 25 малих квадрата. Међутим, без обзира каква је табла за бројање, у сваком великом квадрату има 400 малих квадрата. Дужина странице сваког великог квадрата је лмм, тада је површина сваког великог квадрата лмм2. Након што је покровно стакло покривено, висина између покривног стакла и стакалца је 0,лмм, па је запремина коморе за бројање 0,лмм3 (један десетхиљадити део милилитра). Слика 15-1 Структура плоче за бројање крвних зрнаца (1) Слика 15-2 Структура плоче за бројање крвних зрнаца (2) А. Поглед спреда; Б. Уздужни пресек; увећана квадратна мрежа, велики квадрат у средини је комора за бројање 1. Плоча за бројање крвних зрнаца; 2. Поклопац; 3. Када бројите у комори за бројање, обично пребројите укупан број бактерија у пет квадрата, затим пронађите просечну вредност сваког квадрата, а затим помножите са 25 или 16 да бисте добили Укупан број бактерија у великом квадрату се затим претвара у укупан број бактерија у 1мл бактеријског раствора. Претпоставимо да је укупан број бактерија у пет средњих квадрата А, а фактор разблажења бактеријског раствора Б. Ако је то плоча за бројање са 25 средњих квадрата, онда је укупан број бактерија у 1 мЛ бактеријског раствора {{ 23}} А/5×25×104× Б=50000А·Б (комада) На исти начин, ако је плоча за бројање са 16 квадрата, укупан број бактерија у 1мЛ бактеријског раствора {{ 30}}А/5×16×104×Б=32000А·Б (комади),,
