Разлике и предности и недостаци између трансмисионе флуоресцентне микроскопије и рефлексионе флуоресцентне микроскопије
1. Трансмисиони флуоресцентни микроскоп: Ексцитациони извор светлости се преноси кроз материјал узорка кроз кондензатор да би побудио флуоресценцију. Обично коришћени концентратори тамног поља, или обични концентратори, могу се користити за подешавање рефлектора за претварање ексцитационе светлости и бочне светлости на узорак. Ово је релативно старомодан флуоресцентни микроскоп. Његова предност је јака флуоресценција при малом увећању, док му је мана то што флуоресценција слаби са повећањем. Због тога је боље посматрати веће материјале узорака.
2. Флуоресценцијски микроскоп са падајућим снопом: Ово је нови тип флуоресцентног микроскопа који се развио у модерним временима. За разлику од претходног, побудна светлост пада са сочива објектива на површину узорка, користећи исто сочиво објектива као и кондензатор осветљења и сочиво објектива за прикупљање флуоресценције. Двобојни сепаратор снопа треба додати на оптичку путању, која формира угао од 45 степени са фотоуранијумом. Побуђена светлост се рефлектује у сочиво објектива и скупља се на узорку. Флуоресценција коју генерише узорак и ексцитационо светло које се рефлектује са површине сочива објектива и покривног стакла истовремено улазе у сочиво објектива и враћају се у сепаратор снопа двоструке боје, одвајајући ексцитационо светло и флуоресценцију. Преостала побудна светлост се затим апсорбује филтером за блокирање. Ако се користе различите комбинације ексцитационих филтера, двобојних сепаратора снопа и филтера за блокирање, они могу задовољити потребе различитих флуоресцентних реакционих производа. Предности овог флуоресцентног микроскопа су равномерно осветљење видног поља, јасна слика и јача флуоресценција са већим увећањем.
Предности и мане трансмисионе флуоресцентне микроскопије
Извор светлости: живина лампа високог притиска или халогена лампа.
Рефлектор: Коришћење рефлектора тамног поља за раздвајање ексцитације и флуоресценције.
Објективна сочива: Може се користити било која врста објектива.
Узорак: Танки узорци су погоднији за посматрање трансмисије.
Предности: ① Због употребе кондензатора тамног поља, побудна светлост не може ући у објектив објектива, што олакшава формирање тамне позадине и постизање доброг контраста, а било које објективно сочиво се може користити за посматрање. ② Када користите објектив са малим увећањем, он је светлији од рефлективног флуоресцентног микроскопа.
Недостатак: Центар и висина рефлектора морају бити правилно подешени, иначе се не може добити сјајна флуоресцентна слика. Због ограничења жижне даљине рефлектора тамног поља, дијапозитиви од дебелог стакла се не могу користити. Подручје осветљења видног поља не би требало да буде превелико, иначе може да изазове избледење боје флуоресценције флуоресцентног узорка. Дебели или непрозирни узорци нису погодни.
Предности и мане рефлективне флуоресцентне микроскопије
Извор светлости: живина лампа високог притиска или халогена лампа.
Сочиво за фокусирање: Пошто објектив објектива служи као сочиво за фокусирање, нема потребе за сочивом за фокусирање.
Објективна сочива: Сочиво објектива које се користи мора бити способно да пропушта довољно ултраљубичастог светла и да не производи саму флуоресценцију, без ограничења на нумерички отвор.
Узорак: Могу се посматрати и дебели и непрозирни узорци.
Предности: ① Пошто сочиво објектива служи и као рефлектор, не захтева много подешавања. ② Коришћењем Колар методе осветљења, могу се искористити ефекти отвора бленде и отвора видног поља. Нумерички отвор сочива објектива није ограничен, а слике високе резолуције се такође могу добити при великом увећању. Дебели или непрозирни узорци такође могу бити посматрано, а могу се користити и дебеле покривне плочице. Друге методе посматрања се такође могу комбиновати са рефлектованом флуоресценцијом, посебно са методом фазне разлике и методом диференцијалне интерференције преноса. Може избећи непотребан феномен бледења боје флуоресценције.
Недостатак: Када користите објектив за увећање на земљи, слика је релативно тамна, тако да се мора користити објектив са великим нумеричким отвором бленде. Систем филтера мора ефикасно одвојити луминесценцију побуде и флуоресценцију.,
