Карактеристике и примена конфокалне ласерске микроскопије
Ласерски конфокални микроскоп за скенирање (ЛСЦМ) је тип микроскопа дизајнираног на основу технологије коњугованог фокуса, то јест, да извор ласерске светлости, узорак који се тестира и детектор буду у коњугованом положају један другог.
Фундаментално
У општим микроскопима, жижна раван сочива објектива се поклапа са детектором тако да је посматрана раван слике изолована од суседне аксијалне равни, док се у конфокалним микроскопима узорак осветљава коришћењем светлосне тачке ограничене дифракцијом, а у Овај ефекат изолације се постиже коришћењем отвора на путу сакупљања светлости у фокусној тачки коњугата тачака за филтрирање расуте светлости како би се побољшала резолуција.
Имагинг Феатурес
Само светло рефлектовано од коњугованог слоја узорка може да прође кроз малу рупу на путањи сабирне светлости, а преостале небитне рефлексије слоја узорка су блокиране малом рупом. Ово може довести до значајног повећања резолуције. Доле је приказано упоредо поређење мултидимензионалне флуоресцентне микроскопије и конфокалне микроскопије истог дебелог узорка. Када се направи серија слика у различитим фокалним равнима, може се створити оно што се обично назива "з-стацк", а ова слика приказује и резолуцију и појачање контраста које нуди конфокална микроскопија и основне узроке ових добитака. Испитивање слике на врху хрпе са равним снимања изнад ткива открива много расејане светлости на флуоресцентној слици, док конфокална слика изгледа црна. Ово смањење ПСФ-а у аксијалном правцу је директно одговорно за разлику у резолуцији уоченој на оптичком интерфејсу у средини з-стека.
Још једна карактеристика ласерске скенирајуће конфокалне микроскопије је да је то технологија скенирања слике. Традиционална технологија осветљења широког поља осветљава цео узорак, тако да се слика може директно снимити голим оком или детектором, али ЛСЦМ користи сноп или више фокусираних зрака пролази кроз узорак за скенирање и снимање, а резултујућа слика је назван оптичка секција. Следеће показује разлику између традиционалне методе осветљења широког поља и методе конфокалног осветљења ласерског скенирања.
Стога је практична метода рада савременог конфокалног микроскопа приказана на слици испод. Побуђена светлост коју емитује ласер пролази кроз дихроично огледало и скенира у к и и правцима узорка кроз пар вибрирајућих огледала. Побуђивање (или рефлексија) узорка Светлост улази у ПМТ детектор кроз рупицу и снима се, а снимљена скенирана слика се реконструише од стране рачунара да би се добила стварна слика узорка.
