Флуоресцентна микроскопија Технички параметри Флуоресцентна микроскопија Технике и методе
Технички параметри флуоресцентног микроскопа 1. Широкоугаони окулар 2. Ахроматична сочива објектива 3. Конвертор сочива објектива са четири отвора 4. Епифлуоресцентни уређај Плава (Б) Зелена (Г) побуда 100В живина лампа 5. Механизам за подешавање коаксијалног грубог и финог фокуса: подешавање Опсег фокуса: 15 мм Вредност микропомерања мреже: 0,002 мм 6. Двослојни механички сто Опсег уздужног кретања: 70 мм Опсег бочног кретања: 50 мм
Технички параметри флуоресцентног микроскопа
1. Широкоугаони окулар
2. Ахроматска сочива објектива
3. Носник са четири отвора
4. Епифлуоресцентни уређај плава (Б) зелена (Г) систем побуде 100В живина лампа
5. Механизам за подешавање коаксијалног грубог и финог фокуса: опсег фокуса 15 мм фино померање мреже 0.002 мм
6. Двослојни механички радни сто
Опсег вертикалног померања: 70 мм Опсег бочног кретања: 50 мм
Вештине и методе флуоресцентне микроскопије
(1) Стаклени тобоган
Дебљина стакала треба да буде између 0,8 и 1,2мм. Предебео тобоган ће апсорбовати више светлости с једне стране, а са друге стране, побудна светлост не може да се концентрише на узорак. Слајдови морају бити глатки, уједначене дебљине и без очигледне аутофлуоресценције. Понекад се користе слајдови од кварцног стакла.
(2) Поклопно стакло
Дебљина покривног стакла је око 0.17 мм, глатко. Да би се појачало побудно светло, може се користити и интерферентно покривно стакло, које је специјално покривно стакло обложено са неколико слојева супстанци (као што је магнезијум флуорид) које имају различите ефекте интерференције на светлост различитих таласних дужина, што може учинити флуоресценција иде глатко. Узбудљива светлост пролази кроз и рефлектује се, а ова рефлектована побудна светлост побуђује узорак.
(3) Примерак
Кришке ткива или други узорци не би требало да буду превише дебели. Ако је превише дебео, највећи део ексцитационе светлости ће се потрошити у доњем делу узорка, док горњи део који директно посматра сочиво објектива неће бити у потпуности узбуђен. Поред тога, преклапање ћелија или покривање нечистоћа, утичу на процену.
(4) Средство за монтажу
Глицерин се обично користи као агенс за монтажу, који не сме да има аутофлуоресценцију, безбојан је и провидан, а осветљеност флуоресценције је светлија при пХ 8.5-9.5 и није лако брзо да избледи. Због тога се као средство за монтажу обично користи једнака мешавина глицерола и 0.5мол/л раствора карбонатног пуфера са пХ од 90 до 9,5.
(5) уље за огледало
Генерално, када се посматрају узорци са флуоресцентним микроскопима тамног поља и сочивима за урањање у уље, мора се користити имерзионо уље. Најбоље је користити специјално нефлуоресцентно уље за потапање. Уместо тога се може користити и горњи глицерин, а може се користити и течни парафин, али је индекс преламања низак, што има благи утицај на квалитет слике. Утицај.
Принцип и структурне карактеристике флуоресцентног микроскопа
Флуоресцентна микроскопија користи тачку са високом светлосном ефикасношћу да емитује светлост одређене таласне дужине (као што је ултраљубичасто светло 3650 ин или љубичасто плаво светло 4200 ин) кроз систем филтера као ексцитационо светло да побуђује флуоресцентне супстанце у узорку да емитује флуоресценцију разне боје Након тога посматрајте кроз увећање објектива и окулара. На овај начин, под јаком контрастном позадином, чак и ако је флуоресценција веома слаба, лако се идентификује и има високу осетљивост. Углавном се користи за истраживање структуре и функције ћелије и хемијског састава. Основна структура флуоресцентног микроскопа састоји се од обичног оптичког микроскопа плус неких додатака (као што су флуоресцентни извор светлости, филтер за побуђивање, двобојни разделник зрака и филтер за блокирање, итд.). Флуоресцентни извор светлости—генерално користите живину лампу ултра високог притиска (50-200В), која може да емитује светлост различитих таласних дужина, али свака флуоресцентна супстанца има таласну дужину побуде која производи најјачу флуоресценцију, тако да филтер за побуђивање (Генерално, постоје ултраљубичасти, љубичасти, плави и зелени ексцитациони филтери), који дозвољавају само ексцитационој светлости одређене таласне дужине да прође и озрачи узорак, док апсорбује другу светлост. Након што је свака супстанца озрачена ексцитационим светлом, емитује видљиву флуоресценцију са већом таласном дужином од таласне дужине зрачења за врло кратко време. Флуоресценција је специфична и генерално слабија од ексцитационе светлости. Да би се посматрала специфична флуоресценција, блокирање (или супресија) се мора додати иза сочива објектива и користити заједно са њим.
Разлика између флуоресцентног микроскопа и обичног микроскопа
1. Метода осветљења је обично епископска, односно извор светлости се пројектује на узорак кроз сочиво објектива;
2. Извор светлости је ултраљубичасто светло, таласна дужина је краћа, а резолуција је већа од оне код обичних микроскопа;
3. Постоје два специјална филтера, онај испред извора светлости се користи за филтрирање видљиве светлости, а онај између окулара и сочива објектива се користи за филтрирање ултраљубичастих зрака ради заштите људског ока.
Флуоресцентни микроскоп је такође врста оптичког микроскопа, главна разлика је у томе што је таласна дужина побуђивања различита. Ово одређује разлику између флуоресцентног микроскопа и обичног оптичког микроскопа у погледу структуре и употребе.
Флуоресцентна микроскопија је суштински алат у имунофлуоресцентној цитохемији. Састоји се од главних компоненти као што су извор светлости, систем филтерских плоча и оптички систем. То је употреба одређене таласне дужине светлости да се узорак потакне да емитује флуоресценцију и да се посматра флуоресцентна слика узорка појачавањем сочива објектива и система окулара.
