Како одабрати одговарајући флуоресцентни микроскоп
Флуоресцентни микроскоп је стандардна опрема за микроскопско снимање у лабораторијама и одељењима патологије, која користи карактеристике флуоресценције за посматрање и снимање. Широко се користи у различитим областима као што су ћелијска биологија, неуробиологија, ботаника, микробиологија, патологија, генетика итд. Флуоресцентно снимање има предности високе осетљивости и специфичности, што га чини веома погодним за посматрање дистрибуције специфичних протеина, органела итд. , у ткивима и ћелијама, проучавајући колокацију и интеракције, праћење животних динамичких процеса као што су промене концентрације јона, и тако даље.
Избор микроскопа
Флуоресцентни микроскопи су углавном подељени у три категорије: усправни флуоресцентни микроскопи (погодни за резање), инвертовани флуоресцентни микроскопи (погодни за живе ћелије и такође за резање) и стерео флуоресцентни микроскопи (погодни за веће узорке, као што су биљке, зебра (одрасли/ ембрионални), медака, органи миша/пацова итд.).
Избор блокова флуоресцентних филтера
Избор блокова филтера не треба само да узме у обзир таласне дужине побуђивања и емисије флуоресцентних сонди, већ и да ли постоји неспецифична ексцитација и да ли постоји преслушавање боја за вишебојно обележене узорке. У експерименту ћемо изабрати таласну дужину најближу врхунцу побуде што је више могуће за побуду, а опсег пријема треба да укључује вршну емисију. Пик ексцитације Алека Флуор 488 је 500 нм, а филтер ексцитације 480/40 се може изабрати у флуоресцентном микроскопу. Уобичајени блокови флуоресцентног филтера у флуоресцентној микроскопији могу се поделити у два типа: дуги пролаз (ЛП) и тракасти пролаз (БП), који такође треба да се бирају према потребама.
Конфокални микроскоп
У традиционалним посматрањима флуоресцентне микроскопије, због преклапања флуоресцентно обележених супстанци и спонтаних флуоресцентних структура, оне су чврсто повезане заједно. Међутим, традиционални објективи флуоресцентне микроскопије са падајућим не само да сакупљају светлост из фокалне равни, већ и распршују светлост горе и доле у фокалној равни, што резултира значајним смањењем резолуције и контраста слике.
Конфокално снимање само детектује светлост која се одбија од равни самофокусирања, чиме се решава горњи проблем. Извор светлости формира малу и фину тачку на жижној равни кроз рупицу, а светлост која се емитује из фокалне равни се сакупља кроз сочиво објектива. Већина флуоресценције која се емитује из тачака изнад или испод фокалне равни сочива објектива не може да конвергира до отвора. Само флуоресценција која се налази у фокалној равни и мали део дефокусиране флуоресценције могу проћи кроз рупицу, док светлосни сноп изван фокалне равни конвергира испред или иза плоче са рупицама и блокиран је да уђе у детектор кроз рупицу. Детектована слика је из фокалне равни, тако да је коначни квалитет слике знатно побољшан.
Због различитих предности и практичности ласерске скенирајуће конфокалне микроскопије, она је тренутно незаобилазан експериментални асистент у области биологије ћелије високе прецизности, ботанике и истраживања ћелија. Истовремено, у будућим научноистраживачким центрима, то ће бити најосновније и најосновније истраживачко средство.
