Знање о конфокалној флуоресцентној микроскопији
Основни принцип конфокалне флуоресцентне микроскопије: тачкасти извор светлости се користи за озрачивање узорка, а на фокалној равни се формира добро дефинисана мала светлосна тачка. састављена од разделника. Разделник снопа шаље флуоресценцију директно на детектор. Испред извора светлости и детектора налази се рупица, односно рупица за осветљење и рупица за детекцију. Геометријска величина ова два је иста, око 100-200нм; у односу на светлосну тачку на фокалној равни, ова два су коњугирана, то јест, светлосна тачка пролази кроз низ сочива и коначно може бити фокусирана на отвор за осветљење и отвор за детекцију у исто време. На овај начин, светлост из фокалне равни може да се конвергира у оквиру отвора за детекцију, док је расејана светлост изнад или испод жижне равни блокирана изван отвора за детекцију и не може се снимити. Ласер скенира узорак тачку по тачку, а фотомултипликаторска цев након детекције рупице такође добија конфокалну слику одговарајуће светлосне тачке тачку по тачку, која се претвара у дигитални сигнал и преноси на рачунар, и на крају агрегира у јасну конфокална слика целе фокалне равни на екрану .
Свака слика у фокалној равни је заправо оптички попречни пресек узорка, а овај оптички пресек увек има одређену дебљину, познату и као оптички танак пресек. Пошто је интензитет светлости у жижној тачки много већи од интензитета у нефокусној тачки, а светлост у нефокалној равни филтрира рупица, дубина поља конфокалног система је приближно нула, а скенирање дуж З -оса може да реализује оптичку томографију, формирајући Посматрајте дводимензионални оптички пресек на фокусираном месту узорка. Комбинујући скенирање у равни КСИ (фокална раван) са скенирањем по З-оси (оптичка оса), тродимензионална слика узорка се може добити акумулацијом дводимензионалних слика континуалних слојева и обрадити посебним компјутерским софтвером.
