Карактеристике и примене ласерског конфокалног микроскопа
Док је у нормалном микроскопу раван слике посматрања изолована од суседних аксијалних равни преклапањем фокалне равни сочива објектива са детектором, у конфокалном микроскопу ова изолација се постиже осветљавањем узорка тачком ограниченом дифракцијом од светлост и филтрирање расуте светлости коришћењем отвора на путу сакупљене светлости у коњугованом фокусу ове тачке светлости да би се постигла ова изолација и на тај начин побољшала резолуција.
Само светлост која се рефлектује од слоја коњугованог узорка може да прође кроз отвор на путу сакупљања светлости, док је остатак рефлексије ирелевантног слоја узорка блокиран отвором. Ово даје значајно повећање резолуције. Доле је приказано упоредо поређење мултидимензионалне флуоресцентне микроскопије и конфокалне микроскопије истог дебелог узорка. Када се направи серија слика у различитим фокалним равнима, производи се слика која се обично назива "з-стацк", која приказује резолуцију и појачање контраста које даје конфокална микроскопија и основне разлоге за ова добит. Може се видети да испитивање слике на врху хрпе где је раван снимања изнад ткива открива велику количину распршене светлости на флуоресцентној слици, док слика конфокалног микроскопа изгледа црна. Ово смањење ПСФ-а у аксијалном правцу директно доприноси разлици у резолуцији уоченој на оптичком интерфејсу у средини з-стека.
Слика скенирања оптичког пресека
Још једна карактеристика ласерске скенирајуће конфокалне микроскопије је да је то техника скенирања. Традиционалне технике осветљења широког поља осветљавају цео узорак тако да слика може бити снимљена директно голим оком или детектором, али ЛСЦМ користи један или више фокусираних снопова светлости за скенирање кроз узорак, тако да се резултујућа слика назива оптички пресек, као што је приказано на следећем дијаграму. Разлика између традиционалног широког поља осветљења и конфокалног осветљења ласерског скенирања приказана је у наставку.
Стога је практичан начин модерне конфокалне микроскопије приказан на слици испод. Ексцитационо светло из ласера пролази кроз дихроично огледало и скенира се кроз пар галванометарских огледала у к-смеру и и-смеру узорка, а побуда (или рефлексија) узорка пролази кроз отвор у ПМТ-у. детектор који треба снимити, а снимљена скенирана слика се реконструише од стране компјутера да би се произвела стварна слика узорка.
