Побољшане предности мултифотонске микроскопије за ласерско скенирање
Ласерски скенирајући мултифотонски микроскоп је значајно побољшање оптичке микроскопије, које се углавном манифестује у способности да се посматрају дубоке структуре живих ћелија, фиксних ћелија и ткива и добију јасне и оштре вишеслојне З-равнинске структуре, односно оптичке резове, које могу користити за конструисање тродимензионалних чврстих структура узорака. Конфокални микроскоп користи ласерски извор светлости, који се шири да испуни целу жижну раван сочива објектива, а затим конвергира у веома мале тачке на жижној равни узорка кроз систем сочива објективног сочива. Према нумеричком отвору сочива објектива, пречник светле тачке осветљења је око 0.25-0.8 μм, а дубина је око 0.{{7} }.5 μм. Величина конфокалне тачке је одређена дизајном микроскопа, таласном дужином ласера, карактеристикама објектива, поставкама стања јединице скенирања и својствима узорка. Опсег осветљења и дубина поља микроскопа су велики, док је осветљење конфокалног микроскопа фокусирано на жаришну тачку у фокалној равни. Основна предност конфокалне микроскопије је у томе што може да изврши фино оптичко сечење на дебелим флуоресцентним узорцима (до 50 μм или више), са дебљином од приближно 0,5 до 1,5 μм. Серија слика оптичког пресека може се добити померањем узорка горе-доле помоћу корачног мотора микроскопа на З оси. Прикупљање информација о слици се контролише унутар * * равни, без сметњи од сигнала емитованих са других позиција на узорку. Након уклањања утицаја позадинске флуоресценције и повећања односа сигнал-шум, контраст и резолуција конфокалних слика су значајно побољшани у поређењу са традиционалним флуоресцентним сликама осветљења поља. У многим примерцима, сложене структурне компоненте се преплићу и формирају сложене системе, али када се прикупи довољно оптичких делова, можемо користити софтвер да их реконструишемо у три димензије. Овај експериментални метод се широко користи у биолошким истраживањима да би се разјаснили сложени структурни и функционални односи између ћелија или ткива.
