Побољшане предности мултифотонске микроскопије са ласерским скенирањем
Ласерски скенирајући вишефотонски микроскоп је велико унапређење у оптичкој микроскопији, углавном у могућности да се посматра дубока структура живих и фиксних ћелија и ткива, и да се добију јасне и оштре вишеслојне З-равнинске структуре, односно оптички резови, од којих се може се конструисати тродимензионална чврста структура узорка. Конфокална микроскопија користи ласерски извор светлости који се шири да испуни целу задњу жижну раван сочива објектива, а затим пролази кроз систем сочива објективног сочива да би се конвергирао у веома мале тачке на фокалној равни узорка. У зависности од нумеричког отвора сочива објектива, величина пречника светле тачке осветљења је око 0.25 ~ 0.8 μм, а дубина је око 0.5 ~ 1.5 μм. Величина конфокалне тачке је одређена дизајном микроскопа, таласном дужином ласера, карактеристикама сочива објектива, поставком стања јединице за скенирање и природом узорка. Теренски микроскопи имају велики опсег осветљења и дубину осветљења, док конфокални микроскопи концентришу осветљење на једну фокусну тачку на жижној равни. Најосновнија предност конфокалног микроскопа је могућност прављења финих оптичких пресека дебелих флуоресцентних узорака (до 50 μм или више), са дебљином пресека од око 0,5 до 1,5 μм. Низ слика оптичког пресека може се добити померањем узорка горе-доле помоћу корачног мотора микроскопа З-осе. Аквизиција информација о слици се контролише у првој равни и није ометана сигналима који се емитују са других локација на узорку. Након уклањања ефеката позадинске флуоресценције и повећања односа сигнал-шум, контраст и резолуција конфокалне слике су значајно побољшани у односу на конвенционалне флуоресцентне слике осветљене пољем. У многим примерцима, многе замршене структурне компоненте се преплићу да формирају сложене системе, али када се добије довољно оптичких пресека, можемо их реконструисати у три димензије користећи софтвер. Овај експериментални метод се широко користи у биолошким истраживањима да би се разјаснили сложени структурни и функционални односи између ћелија или ткива.
