Припрема и посматрање биолошких узорака за електронску микроскопију
Резолуција микроскопа зависи од таласне дужине коришћене светлости, електронски микроскоп је почео да се појављује 1933. године због употребе много краће таласне дужине од видљиве светлости електронског зрака као извора светлости, тако да је резолуција може постићи него што је оптички микроскоп знатно побољшан. Различити извор светлости такође одређује низ разлика између електронског микроскопа и оптичког микроскопа.
У складу са разликама у принципу снимања електронског снопа и улози узорка на различите начине, савремени електронски микроскоп је развијен да формира више типова, тренутно * најчешће се користи трансмисиони електронски микроскоп и скенирајући електрон микроскоп, први може бити у опсегу од 1,000-1,000,000 пута укупног повећања опсега промена, други може бити у укупном увећању { {4}},000 пута укупно увећање промена између. Овај експеримент се фокусира на припрему узорака за две врсте микроскопа, трансмисиони електронски микроскоп и скенирајући електронски микроскоп.
Материјали
1. Сој Есцхерицхиа цоли (Есцхерицхиа цоли, Есцхерицхиа цоли) коси.
2. Раствори или реагенси Амил ацетат, концентрована сумпорна киселина, анхидровани етанол, стерилна вода, 2% натријум фосфоволфрамна киселина (пХ 6.5-8.0) водени раствор, 0.3% раствор поливинил формалдехида (растворен у трихлорометану), цитокром ц, амонијум ацетат, плазмид пБР322.
3. Инструменти или други прибор Обичан оптички микроскоп, бакарна мрежа, порцелански левак, чаша, равна посуда, стерилна бирета, стерилна пинцета, ланцета, дијапозитиви, ** плоча за бројање, вакуум облога, сушач за критичну тачку и тако даље.
Кораци операције
(И) Припрема узорка и посматрање трансмисионе електронске микроскопије
1. Третман металне мреже
Узорци за оптичку микроскопију стављају се на стакалце ради посматрања. Међутим, у трансмисионој електронској микроскопији, пошто електрони не могу да продру кроз стаклени лист, само мрежасти материјал се може користити као носач, који се обично назива мрежа носача. Носећа мрежа се може поделити на много различитих спецификација због различитих материјала и облика, од којих је * који се обично користи бакарна мрежа 200-400 (број рупа). Бакарну мрежу треба третирати пре употребе како би се уклонила прљавштина на њој и одржала чиста, иначе ће утицати на квалитет носећег филма и јасноћу фотографија узорка. Бакарна мрежа која се користи у овом експерименту је 400 месх, која се може третирати на следећи начин: прво је избелити амил ацетатом неколико сати, затим испрати дестилованом водом неколико пута, а затим избелити у безводном етанолу за дехидрација. Ако бакарна мрежа према горе наведеној методи још увек није чиста, може се користити за разблаживање концентроване сумпорне киселине (1:1) потопљена у 1-2 минута, или у 1% раствор НаОХ кувана неколико минута, испрана неколико пута дестилованом водом , стављен у дехидратацију безводног етанола, који ће се користити.
2. Припрема потпорног филма
У посматрању узорка, у мрежи носача такође треба да буде прекривен слојем неструктурираног, уједначеног филма, иначе ће мали узорци исцурити из рупа у мрежи носача, овај слој филма се обично назива потпорни филм или носећи филм. Потпорни филм треба да буде провидан за електроне, а његова дебљина генерално треба да буде мања од 20 нм; под утицајем електронског снопа, филм такође треба да има одређени степен механичке чврстоће, може одржати стабилност структуре и има добру топлотну проводљивост; поред тога, мрежа за подршку не би требало да има видљиву структуру под електронским микроскопом, и да нема хемијску реакцију са узорком који се носи, и не омета посматрање узорка, а његова дебљина је генерално око 15 нм. Носећи филм може бити направљен од пластичне фолије (нпр. ватрогасна памучна фолија, полиетилен формалдехидна фолија, итд.), угљеничне фолије или металне фолије (нпр. берилијум фолија, итд.). У рутинским условима рада, захтеви се могу испунити пластичном фолијом, док је припрема пластичне фолије у фолији од ватреног памука релативно лака, али чврстоћа није тако јака као полиетилен формалдехидна фолија.
