Неколико специјалних оптичких микроскопа и њихове разлике
1 микроскоп тамног поља
Микроскоп тамног поља нема функцију посматрања фине структуре унутар објекта, али може да разликује постојање и кретање честица изнад 0.004 μм. Због тога се често користи за посматрање структуре живих ћелија и кретања интрацелуларних честица.
Основни принцип микроскопије тамног поља је Тиндалов ефекат. Када сноп светлости прође кроз мрачну просторију, може се посматрати „пут“ светле прашине у ваздуху из правца који је окомит на упадну светлост. Овај феномен је Тиндалов ефекат.
Након што се микроскоп тамног поља замени кондензатором тамног поља на обичном оптичком микроскопу, због оклузије унутрашње параболичке структуре кондензатора, светлост озрачена на површини објекта који се прегледа не може директно ући у сочиво објектива и окулар, а кроз њега може проћи само расејана светлост, па је видно поље тамно.
Основна употреба микроскопије тамног поља је следећа:
1. Инсталирајте кондензатор тамног поља (или користите дебели црни папир да направите светлосни штит и поставите га испод кондензатора обичног микроскопа да бисте добили ефекте тамног поља).
2. Изаберите јак извор светлости, обично са светлом микроскопа да спречите директну светлост да уђе у сочиво објектива.
3. Додајте кап кедровог уља између кондензатора и стакленог тобогана да бисте избегли потпуну рефлексију светла на кондензатору, неуспех да дође до предмета који треба да се прегледа и осветљења тамног поља.
4. Извршите централно подешавање, односно померите кондензатор хоризонтално тако да оптичка оса кондензатора и оптичка оса микроскопа буду стриктно на правој линији. Подигните и спустите кондензатор, поравнајте фокусну тачку кондензатора (врх конусне греде на слици 1-2) са објектом који се тестира.
5. Изаберите објектив објектива који одговара кондензатору, подесите жижну даљину и радите према методи обичног микроскопа.
Стереомицросцопе
Стерео микроскопи, такође познати као чврсти микроскопи или огледала за сецирање, приказују усправну тродимензионалну свемирску слику и имају карактеристике снажног стереоскопског ефекта, јасне и широке слике, дугу радну удаљеност (обично 110 мм) и континуирано гледање у увећању. Често се користи у биологији за посматрање у реалном времену током дисекције
Извор светлости обичног оптичког микроскопа је паралелна светлост, тако да формира дводимензионалну раван слику; док стерео микроскоп усваја двоканални оптички пут, а леви и десни сноп у бинокуларној цеви имају одређени угао гледања (углавном 12о15о), тако да може Формира се стереоскопска слика у тродимензионалном простору.
Стерео микроскопи се користе на сличан начин као и обични светлосни микроскопи, али су погоднији. Главна разлика између њих је:
1. Објекти за инспекцију стерео микроскопа не морају да се праве у дијапозитиве.
2. Степен стерео микроскопа је директно фиксиран на бази огледала, и опремљен је црно-белим двостраним панелима или стакленим панелима, а оператер може изабрати према објекту и захтевима инспекције микроскопа.
3. Снимање стерео микроскопа је усправно, што је погодно за операције дисекције.
4. Стерео микроскоп има само једно сочиво објектива, а његово увећање се може континуирано подешавати ротирањем завртња за подешавање.
флуоресцентни микроскоп
Флуоресцентна микроскопија је оптички алат за квалитативна и квантитативна истраживања интензитета флуоресценције коју емитују интрацелуларне супстанце.
Постоје две врсте флуоресцентних супстанци у ћелијама, једна може флуоресцирати директно након зрачења ултраљубичастим зрацима, као што је хлорофил, итд.; друге супстанце немају ово својство, али ако су обојене специфичним флуоресцентним бојама или флуоресцентним антителима, могу да флуоресцирају ултраљубичастим зрацима. Такође може флуоресцирати након зрачења
Усправни биолуминисцентни микроскоп/обрнути биолуминисцентни микроскоп
Принцип флуоресцентног микроскопа је да користи тачкасти извор светлости са високом светлосном ефикасношћу (као што је живина лампа ултра високог притиска) да емитује светлост одређене таласне дужине (као што је ултраљубичасто светло 3650λ или љубичасто-плаво светло 4200λ) кроз систем филтера као побудна светлост за побуђивање флуоресцентних супстанци у узорку. Након што се емитује флуоресценција различитих боја, она се филтрира помоћу филтера за блокирање (или потискивање) иза сочива објектива, а затим се посматра кроз увећање окулара.
Филтер за блокирање има две функције: једна је да апсорбује и блокира ексцитационо светло да уђе у окулар како не би пореметио флуоресценцију и оштетио очи; други је одабрати и пустити да прође одређена флуоресценција, показујући специфичну флуоресцентну боју.
Флуоресцентни микроскопи се могу поделити у два типа према принципу оптичке путање:
1. Трансмисиона флуоресцентна микроскопија
У старијим флуоресцентним микроскопима, ексцитациони извор светлости се пропушта кроз материјал узорка кроз кондензатор да би се побудила флуоресценција. Предност је што је флуоресценција јака при малом увећању, али недостатак је што се флуоресценција смањује са повећањем увећања. Тако да је погодан само за посматрање већег материјала узорака.
2. Епифлуоресцентна микроскопија
Побуђена светлост пада са сочива објектива на површину узорка, односно, исто сочиво објектива се користи као кондензатор осветљења и сочиво објектива за прикупљање флуоресценције.
У оптичку путању треба додати дихроични разделник снопа (дихроично огледало), који са оптичком осом формира угао од 45о. Побуђена светлост се рефлектује у сочиво објектива и сакупља на узорку. Побуђена светлост рефлектована од површине клизача улази у сочиво објектива у исто време, враћа се у двобојни разделник снопа, одваја ексцитационо светло од флуоресценције, а преостало побудно светло се апсорбује филтером за блокирање. Ако пређете на комбинацију различитих ексцитационих филтера/двобојних разделника зрака/филтера за блокирање, потребе за различитим флуоресцентним реакционим производима могу бити задовољене.
Предност ове врсте флуоресцентног микроскопа је у томе што је осветљење видног поља уједначено, слика јасна, а што је веће увећање, то је флуоресценција јача.
фазни контрастни микроскоп
Микроскоп фазног контраста је микроскоп који може претворити фазну разлику (или разлику оптичке путање) која настаје када светлост прође кроз објекат у промену амплитуде (интензитета светлости). Углавном се користи за посматрање живих ћелија, необојених делова ткива или обојених узорака којима недостаје контраст.
Људско око може да идентификује само промене таласне дужине (боје) и амплитуде видљиве светлости, али не и промене фазе. Међутим, већина биолошких узорака је веома транспарентна, а амплитуда светлосног таласа је у основи непромењена након проласка, а мења се само фаза.
Микроскоп фазног контраста у основи мења разлику оптичке путање видљиве светлости која пролази кроз узорак у амплитудну разлику, чиме се побољшава контраст између различитих структура и чине различите структуре јасно видљивим. Светлост се прелама након проласка кроз узорак, одступа од првобитне оптичке путање и истовремено касни за 1/4λ (таласна дужина). Ако се повећа или смањи за 1/4λ, разлика оптичке путање постаје 1/2λ, а два зрака интерферирају након оптичке осе. Ојачати, повећати или смањити амплитуду, побољшати контраст.
Структурно, фазни контрастни микроскопи се разликују од обичних оптичких микроскопа по томе:
1. Прстенаста дијафрагма има дијафрагму са прстенастим отвором, која се уграђује између извора светлости и кондензатора. Функција је да светлост која пролази кроз кондензатор формира шупљи светлосни конус и фокусира се на узорак.
2. Фазна плоча Микроскоп фазног контраста додаје фазну плочу обложену магнезијум флуоридом унутар сочива објектива да одложи фазу директне или дифрактиране светлости за 1/4λ. На фазној плочи постоје два региона, део кроз који пролази директна светлост назива се "коњугована површина", а део кроз који пролази дифрактована светлост назива се "компензациона површина". Фазне плоче су подељене у два типа према њиховом радном ефекту:
(1) Плус фазна плоча: директна светлост се одлаже за 1/4λ, а светлосни таласи се комбинују након што се два сета светлосних таласа комбинују да би повећали амплитуду, а структура узорка је светлија од околног медија, формирајући светли контраст (или негативан контраст).
(2) Б плус фазна плоча: Дифрактована светлост касни за 1/4λ, а светлосни таласи две групе светлости се одузимају након што се оса поравна, а амплитуда постаје мања. Структура узорка је тамнија од околног медијума, формирајући тамни контраст (или позитиван контраст). Објектив са фазном плочом назива се фазно контрастно сочиво објектива, које је често означено са "Пх" на кућишту сочива објектива.
