Структура и главне компоненте флуоресцентног микроскопа
Флуоресцентна микроскопија је суштински алат у имунофлуоресцентној цитохемији. Састоји се од главних компоненти као што су извор светлости, систем филтерских плоча и оптички систем. То је употреба одређене таласне дужине светлости да се узорак потакне да емитује флуоресценцију и да се посматра флуоресцентна слика узорка појачавањем сочива објектива и система окулара.
Структура и главне компоненте флуоресцентног микроскопа
(1) Извор светлости
Данас се као извори светлости често користе живине лампе од 200В ултра високог притиска. Направљене су од кварцног стакла, сферног облика у средини, а унутра је пуњена одређена количина живе. Током рада, пражњење између две електроде изазива испаравање живе, а притисак ваздуха у кугли брзо расте. Када жива потпуно испари, може да достигне 50-70 стандардни атмосферски притисак, а овај процес обично траје око 5-15 минута. Луминисценција живине лампе ултра високог притиска је резултат емисије светлосних кванта током континуиране дисоцијације и редукције молекула живе пражњењем између електрода. Емитује јако ултраљубичасто и плаво-љубичасто светло, што је довољно да побуди различите флуоресцентне супстанце, па се широко користи у флуоресцентној микроскопији.
Живине лампе ултра високог притиска такође емитују много топлоте. Због тога, кућа за лампу мора имати добре услове одвођења топлоте, а температура радног окружења не би требало да буде превисока.
Нова живина лампа ултра високог притиска може се упалити без високог напона на почетку употребе. Након периода употребе, потребно га је покренути на високом напону (око 15000В). Након покретања, радни напон одржавања је углавном 50-60В, а радна струја је око 4А. Просечан животни век живине лампе од 200 В ултра високог притиска је око 200 сати ако се користи сваки пут 2 сата. Што је време рада краће, то је краћи животни век. Ако се користи само 20 минута, животни век ће се смањити за 50 процената. Стога, минимизирајте број покретања када га користите. Током употребе сијалице, њена светлосна ефикасност се постепено смањује. Након што се лампица угаси, сачекајте да се охлади пре поновног покретања. Не гасити сијалицу одмах након паљења, како не би оштетили електроду услед непотпуног испаравања живе. Генерално, потребно је сачекати 15 минута. Због високог притиска живине лампе ултра високог притиска и јаких ултраљубичастих зрака, сијалица се мора ставити у комору лампе пре него што се запали, како не би оштетила очи и изазвала рад у случају експлозије. .
Коло живине лампе ултра високог притиска (100В или 200В) извора светлости и неколико делова укључујући трансформатор, баласт и старт. Постоји систем за подешавање светлосног центра сијалице у комори лампе. Иза сијалице је постављен алуминијумски обложен конкавни рефлектор, а испред је уграђено сочиво за прикупљање светлости.
Домаћа живина лампа ултра високог притиска ГЦК-200 има добре перформансе и може да замени увезене сијалице као што је ХБО-200. Просечан животни век је више од 200х, а цена је релативно ниска.
Једноставан и преносив флуоресцентни извор светлости са високом температуром у боји, развијен у мојој земљи, има малу величину, малу тежину, малу снагу, двоструку употребу наизменичне и једносмерне струје (са једносмерним напајањем), лак за ношење, лак за употребу и има популаризовано и примењено.
(2) Систем филтера у боји
Систем филтера у боји је важан део флуоресцентног микроскопа, који се састоји од ексцитационе филтерске плоче и филтерске плоче за пресовање. Модел филтерске плоче и назив сваког произвођача често нису уједначени. Плоче филтера су углавном назване према основној боји, слова испред представљају боју, слова позади представљају стакло, а бројеви представљају карактеристике модела. Олимпус микроскоп
(3) Објективна сочива
Могу се користити различита сочива објектива, али се користе ахроматска сочива објектива јер је њихова аутофлуоресценција минимална и њихова својства преноса светлости (опсег таласних дужина) су погодна за флуоресценцију. Пошто је флуоресцентни сјај слике у видном пољу микроскопа пропорционалан квадрату односа отвора сочива објектива и обрнуто пропорционалан његовом увећању, да би се побољшала осветљеност флуоресцентне слике, сочиво објектива са великим треба користити однос бленде. Нарочито при великом увећању његов ефекат је веома очигледан. Стога, за узорке са недовољном флуоресценцијом, сочиво објектива са великим односом отвора бленде треба користити са што нижим окуларом (4×, 5×, 6,3×, итд.).
(4) Огледало
Рефлективни слој рефлектора је углавном алуминијумски обложен, јер алуминијум мање апсорбује у плаво-љубичастом подручју ултраљубичасте и видљиве светлости, а рефлексија је већа од 90 процената, док је рефлексија сребра само 70 процената. Генерално, користи се раван рефлектор.
(5) Кондензатор
Кондензатори дизајнирани за флуоресцентну микроскопију су направљени од кварцног стакла или другог стакла провидног УВ-зрака. Постоје два типа кондензатора чистог поља и кондензатора тамног поља. Постоје и фазни контрастни флуоресцентни концентратори.
(6) Епи-лигхт уређај
Нови тип епи-лигхт уређаја је да након што светлост из извора светлости удари у интерферентни спектроскопски филтер, део кратке таласне дужине (ултраљубичаста и љубичасто плава) се рефлектује због својстава премаза на филтеру. Када је филтер окренут према извору светлости, угао је 45. Када је нагнут, он пуца на сочиво објектива вертикално, и пуца на узорак кроз сочиво објектива, тако да је узорак узбуђен. У овом тренутку, сочиво објектива директно делује као колектор светлости. Истовремено, дугачак део филтера (зелени, жути, црвени, итд.) је провидан за филтер, тако да се не рефлектује у правцу сочива објектива, а филтер делује као плоча филтера за побуђивање, пошто је флуоресценција узорка у дуготаласној области видљиве светлости, може проћи кроз филтер и доћи до окулара за посматрање, осветљеност флуоресцентне слике се повећава са повећањем увећања и јача је од пропуштене светлости извор при великом увећању. Поред функције трансмисионог извора светлости, погоднији је за директно посматрање непрозирних и провидних узорака, као што су дебеле кришке, филтерске мембране, колоније и узорци културе ткива. Нови флуоресцентни микроскопи развијени последњих година углавном користе епи-светлосне уређаје, који се називају епифлуоресцентни микроскопи.
