Разлика између ласерског конфокалног микроскопа и традиционалног оптичког микроскопа
Ласерска скенирајућа конфокална флуоресцентна микроскопија је релативно напредан инструмент за анализу молекуларне и ћелијске биологије који користи компјутерску, ласерску и технологију обраде слике за добијање тродимензионалних података биолошких узорака. Углавном се користи за посматрање структуре живих ћелија и биолошких промена специфичних молекула и јона, квантитативне анализе и квантитативног одређивања у реалном времену.
Принцип ласерске конфокалне микроскопије: користите отвор за осветљење постављен иза извора светлости и отвор за детекцију постављен испред детектора да бисте остварили осветљење тачке и детекцију тачке. Светлост која се емитује из извора светлости кроз отвор за осветљење фокусира се на тачку у фокалној равни узорка, а емитована флуоресценција из ове тачке се снима на рупици за детекцију, а свако емитовано светло изван ове тачке је блокирано детекцијом. пинхоле. Рупа за осветљење и рупица за детекцију су коњуговани са озраченом тачком или детектованом тачком, тако да је детектована тачка конфокална тачка, а раван у којој се детектована тачка налази је конфокална раван.
Рачунар приказује откривене тачке на екрану рачунара у облику тачака слике. Да би се генерисала комплетна слика, систем за скенирање на оптичкој путањи скенира фокалну раван узорка да би генерисао комплетну конфокалну слику. Све док се сцена креће горе-доле дуж З осе, нови слој узорка се помера у конфокалну раван, а нови слој узорка се снима на монитору. Континуалним кретањем З осе могу се добити континуиране слике различитих слојева узорка. Светла слика.
Разлика између традиционалних светлосних микроскопа
Традиционални флуоресцентни микроскопи имају непремостиви недостатак: флуоресцентне структуре изван фокалне равни су замућене и замућене. Разлог је тај што већина биолошких узорака има структуре које се преклапају. Ако су флуоресцентно обележене структуре распоређене на различитим нивоима и преклапају се, расејану флуоресценцију изнад или испод фокалне равни такође прима сочиво објектива, а резолуција флуоресцентног микроскопа ће бити знатно побољшана. смањити.
На основу традиционалних оптичких микроскопа, ласерски скенирајући конфокални микроскопи користе ласерско светло као извор светлости, усвајају принцип и уређај коњугованог фокусирања и користе рачунаре за обављање дигиталне обраде слике, посматрања, анализе и излаза посматраних објеката. Узорак се може томографски скенирати и снимити ради недеструктивног посматрања и анализе тродимензионалне просторне структуре ћелија. Истовремено, користећи имунофлуоресцентно обележавање и сонде за јонско флуоресцентно обележавање, ова технологија може не само да посматра фиксне ћелије и делове ткива, већ и да врши динамичко посматрање и детекцију структуре, молекула, јона и животних активности живих ћелија у реалном времену, на субћелијском нивоу Посматрање физиолошких сигнала као што су Ца2 плус, пХ вредност, мембрански потенцијал и промене у морфологији ћелије, постала је нова генерација моћних истраживачких алата у областима морфологије, молекуларне биологије ћелије, неуронауке, фармакологије и генетике.
