Разлика између трансмисионе флуоресцентне микроскопије и рефлексионе флуоресцентне микроскопије
1. Трансмисиони флуоресцентни микроскоп: Ексцитациони извор светлости се преноси кроз материјал узорка кроз кондензатор да би побудио флуоресценцију. Обично коришћени концентратори тамног поља, или обични концентратори, могу се користити за подешавање рефлектора за претварање ексцитационе светлости и бочне светлости на узорак. Ово је релативно старомодан флуоресцентни микроскоп. Његова предност је јака флуоресценција при малом увећању, док му је мана то што флуоресценција слаби са повећањем. Због тога је боље посматрати веће материјале узорака.
2. Флуоресценцијски микроскоп са падајућим снопом: Ово је нови тип флуоресцентног микроскопа који се развио у модерним временима. За разлику од претходног, побудна светлост пада са сочива објектива на површину узорка, користећи исто сочиво објектива као и кондензатор осветљења и сочиво објектива за прикупљање флуоресценције. Двобојни сепаратор снопа треба додати на оптичку путању, која формира угао од 45 степени са фотоуранијумом. Побуђена светлост се рефлектује у сочиво објектива и скупља се на узорку. Флуоресценција коју генерише узорак и ексцитационо светло које се рефлектује са површине сочива објектива и покривног стакла истовремено улазе у сочиво објектива и враћају се у сепаратор снопа двоструке боје, одвајајући ексцитационо светло и флуоресценцију. Преостала побудна светлост се затим апсорбује филтером за блокирање. Ако се користе различите комбинације ексцитационих филтера, двобојних сепаратора снопа и филтера за блокирање, они могу задовољити потребе различитих флуоресцентних реакционих производа. Предности овог флуоресцентног микроскопа су уједначено осветљење видног поља, јасна слика и јача флуоресценција са већим увећањем.
Предности и мане трансмисионе флуоресцентне микроскопије
Извор светлости: живина лампа високог притиска или халогена лампа.
Рефлектор: Коришћење рефлектора тамног поља за раздвајање ексцитације и флуоресценције.
Објективна сочива: Може се користити било која врста објектива.
Узорак: Танки узорци су погоднији за посматрање трансмисије.
Предности: ① Због употребе кондензатора тамног поља, побудна светлост не може ући у објектив објектива, што олакшава формирање тамне позадине и постизање доброг контраста, а било које објективно сочиво се може користити за посматрање. ② Када користите објектив са малим увећањем, он је светлији од рефлективног флуоресцентног микроскопа.
Недостатак: Центар и висина рефлектора морају бити правилно подешени, иначе се не може добити сјајна флуоресцентна слика. Због ограничења жижне даљине рефлектора тамног поља, дијапозитиви од дебелог стакла се не могу користити. Подручје осветљења видног поља не би требало да буде превелико, иначе може да изазове избледење боје флуоресценције флуоресцентног узорка. Дебели или непрозирни узорци нису погодни.
