Постоје две врсте флуоресцентних микроскопа на основу њихових светлосних путања:
1. Трансмисиони флуоресцентни микроскоп: Ексцитациони извор светлости се користи за побуђивање флуоресценције проласком кроз материјал узорка кроз кондензаторско сочиво. Такође се могу користити уобичајено коришћени концентратори тамног поља, а обични концентратори се могу користити за подешавање рефлектора да преусмери и бочно усмери ексцитационо светло на узорак. Ово је релативно старомодан флуоресцентни микроскоп. Његова предност је јака флуоресценција при малом увећању, али недостатак је што се флуоресценција смањује са повећањем увећања. Због тога је боље посматрати веће материјале узорака.
2. Флуоресценцијски микроскоп са падајућим светлом је нова врста флуоресцентног микроскопа развијена у модерним временима. За разлику од горе наведеног, побудна светлост пада са сочива објектива наниже на површину узорка, користећи исто сочиво објектива као и кондензатор осветљења и сочиво објектива за прикупљање флуоресценције. Двобојни разделник снопа треба додати на оптичку путању, која је удаљена 45 степени од лаког уранијума. Угао, побудна светлост се рефлектује у сочиво објектива и фокусира на узорак. Флуоресценција коју генерише узорак, као и побудна светлост која се рефлектује са површине сочива објектива и покривног стакла, улазе у сочиво објектива и враћају се у разделник снопа двоструке боје, одвајајући ексцитационо светло и флуоресценцију. Преостала побудна светлост се затим апсорбује филтером за блокирање. Ако се користе различите комбинације ексцитационих филтера/двобојних сепаратора зрака/филтара за блокирање, оне могу задовољити потребе различитих флуоресцентних реакционих производа. Предности овог флуоресцентног микроскопа су равномерно осветљење поља, јасна слика и јача флуоресценција са већим увећањем.
Упутство за употребу флуоресцентног микроскопа
1. Укључите извор светлости. Живину лампу ултра високог притиска треба претходно загрејати неколико минута да би постигла максималну осветљеност.
2. Трансмисиона флуоресцентна микроскопија захтева уградњу потребног ексцитационог филтера између извора лампе и кондензатора, и одговарајућег филтера за блокирање иза сочива објектива. Флуоресценцијски микроскоп са падајућим светлом треба да убаци потребан филтер за побуђивање/разделник снопа са две боје/блок филтера за блокирање у прорез оптичког пута.
3. Посматрајте микроскопом мале снаге и подесите центар извора светлости према уређају за подешавање различитих типова флуоресцентних микроскопа, тако да се налази у центру целе тачке осветљења.
4. Поставите узорак и фокусирајте га за посматрање. Треба обратити пажњу током употребе: Не посматрајте директно очима пре постављања филтера да бисте избегли оштећење очију; Када се узорци посматрају уљним микроскопом, мора се користити посебан нефлуоресцентни микроскоп за уље; Након што се живина лампа високог притиска искључи, не може се одмах поново укључити. Потребно је 5 минута да се поново покрене, иначе ће бити нестабилан и утицати на животни век живине лампе.
(3) Посматрањем под флуоресцентним микроскопом на платформи за учење помоћу филтера плавољубичастог светла, могу се видети ћелије обојене 0.01% акридин наранџасте флуоресцентне боје. Језгро и цитоплазма су узбуђени да производе две различите боје флуоресценције (тамно зелена и наранџасто црвена).
