Које су предности конфокалне ласерске микроскопије
У поређењу са традиционалним микроскопима широког поља, ласерска скенирајућа конфокална микроскопија има карактеристике високе дефиниције, високе резолуције и високе осетљивости. Широко се користи у области биомедицине и постао је важан алат за снимање у овој области. Зашто конфокал може добити толико љубави и које предности има? Овај чланак наводи три аспекта за разматрање предности конфокалног.
Прикупите сигнал само у фокалној равни, чинећи слику јасном од замућења
Дакле, како конфокална микроскопија постиже ову предност? Ово је због кључног конфокалног хардвера — рупице, као што је приказано на слици 2. То је мала рупа испред детектора и постављена на оптичку раван која је коњугирана са жижном равни узорка. Када ексцитационо светло озрачи узорак, и фокална и нефокална раван области узорка биће побуђене да генеришу сигнале флуоресценције, подесите одговарајућу величину отвора (обично 1 Ау), тако да сигнал флуоресценције на фокалној равни (зелена тачкаста линија) могу бити флуоресцентни сигнали (црвене и плаве испрекидане линије) који пролазе кроз отвор да би дошли до детектора ван фокалне равни не могу доћи до детектора кроз отвор. Додатком хардверских рупица, конфокал може да добије јасне и висококвалитетне слике без промене методе прављења обичних флуоресцентних микроскопа.
Због постојања рупице, сигнал можемо добити само у фокалној равни и добити дводимензионалну слику високе резолуције. Континуираним подешавањем положаја З-осе могу се добити дводимензионалне слике на различитим позицијама З-осе, а може се добити и серија континуираних слика „оптичког пресека“. Након добијања ових оптичких резова, 3Д модул опремљен софтвером инструмента може се користити за реконструкцију 3Д слике како би се направила јасна 3Д слика. Ова недеструктивна, континуирана колекција слика оптичког пресека остварује функцију "ЦТ ћелије".
Тачност резултата колокализације је уско повезана са резолуцијом слике, тако да морамо да изаберемо метод снимања слике веће резолуције када изводимо експерименте колокализације. У поређењу са традиционалним микроскопима, конфокална микроскопија је постала моћно средство за истраживање колокализације због својих предности у високој резолуцији.
Због постојања границе дифракције, конвенционална конфокална оптичка резолуција је око 200нм. Када треба да посматрамо структуре веће од 200 нм, конфокално може прецизно одредити степен колокализације. Ако је потребна анализа колокализације, може се изабрати модул за анализу колокализације опремљен у конфокалном софтверу.
