Која је разлика између флуоресцентне и ласерске конфокалне микроскопије?
флуоресцентни микроскоп
1. Флуоресцентни микроскоп је уређај који користи ултраљубичасто светло као извор светлости да осветли предмет који се испитује, узрокујући да емитује флуоресценцију, а затим посматра облик и положај објекта под микроскопом. Флуоресцентна микроскопија се користи за проучавање апсорпције, транспорта, дистрибуције и локализације супстанци унутар ћелија. Неке супстанце у ћелијама, као што је хлорофил, могу да емитују флуоресценцију након што су изложене ултраљубичастом зрачењу; Неке супстанце саме по себи можда не емитују флуоресценцију, али ако су обојене флуоресцентним бојама или флуоресцентним антителима, оне такође могу да емитују флуоресценцију под ултраљубичастим зрачењем. Флуоресцентна микроскопија је један од алата за квалитативна и квантитативна истраживања ових супстанци.
2. Принцип флуоресцентног микроскопа:
(А) Извор светлости: Извор светлости емитује светлост различитих таласних дужина (од ултраљубичастог до инфрацрвеног).
(Б) Извор светлости ексцитационог филтера: Преноси светлост одређене таласне дужине која може да произведе флуоресценцију у узорку, док блокира светлост која је бескорисна за ексцитацију флуоресценције.
(Ц) Флуоресцентни узорци: углавном обојени флуоресцентним пигментима.
(Д) Филтер за блокирање: селективно преноси флуоресценцију блокирањем ексцитационе светлости коју узорак није апсорбовао, а неке таласне дужине се такође селективно преносе у флуоресценцији. Микроскоп који користи ултраљубичасто светло као извор светлости да емитује флуоресценцију из озраченог објекта. Електронски микроскоп су први саставили Кнорр и Харроска у Берлину, Немачка, 1931. Овај тип микроскопа користи брзи електронски сноп уместо снопа светлости. Због много краће таласне дужине протока електрона у поређењу са светлосним таласима, увећање електронског микроскопа може да достигне 800000 пута, уз минималну границу резолуције од 0,2 нанометра. Скенирајући електронски микроскоп, који је почео да се користи 1963. године, омогућава људима да виде сићушне структуре на површини објеката.
3. Обим примене: Користи се за повећање слика малих објеката. Обично се користи за посматрање биологије, медицине, микроскопских честица итд.
конфокални микроскоп
1. Конфокални микроскоп додаје полурефлективно сочиво на путању рефлектоване светлости, које савија рефлектовану светлост која је већ прошла кроз сочиво у другим правцима. У фокусној тачки постоји преграда са рупом, а мала рупа се налази на жаришту. Иза преграде је фотоумножачка цев. Може се замислити да се рефлектована светлост пре и после жаришне тачке детекције не може фокусирати на малу рупу кроз овај конфокални систем и да ће бити блокирана преградом. Дакле, фотометар мери интензитет рефлектоване светлости у жижној тачки.
2. Принцип: Традиционални оптички микроскопи користе изворе светлости на терену, а на слику сваке тачке на узорку утиче дифракција или расејана светлост из суседних тачака; Конфокални микроскоп за ласерско скенирање користи ласерски сноп да формира тачкасти извор светлости кроз осветљену рупу за скенирање сваке тачке у фокалној равни узорка. Осветљена тачка на узорку се снима на отвору за детекцију и прима се тачку по тачку или линију помоћу фотомултипликаторске цеви (ПМТ) или уређаја за термоелектричну спрегу (цЦЦД) након рупице за детекцију, брзо формирајући флуоресцентну слику на монитору рачунара екран. Рупа за осветљење и рупица за детекцију су коњуговани у односу на жижну раван сочива објектива. Тачке на жижној равни су истовремено фокусиране на отвор за осветљење и емисиони отвор, а тачке изван жижне равни неће бити снимљене на отвору за детекцију. Ово резултира конфокалном сликом која представља оптички попречни пресек узорка, превазилазећи недостатак замућених слика у конвенционалној микроскопији.
3. Области примене: укључујући медицину, истраживање животиња и биљака, биохемију, бактериологију, ћелијску биологију, науку о ткивима и ембрионима, науку о храни, генетику, фармакологију, физиологију, оптику, патологију, ботанику, неуронауку, биологију мора, науку о материјалима, електронску науку, механика, геологија нафте и минералогија.
