Која је сврха конфокалног микроскопа?
1. После напора и побољшања наших великих претходника, оптички микроскоп је достигао тачку савршенства. У ствари, обични микроскопи нам могу пружити прелепе микроскопске слике једноставно и брзо. Међутим, десио се догађај који је донео револуционарну иновацију у овај скоро савршен свет микроскопа, а то је проналазак „конфокалног микроскопа за ласерско скенирање“. Карактеристика овог новог типа микроскопа је да усваја оптички систем који само издваја информације о слици на површини на којој је фокус концентрисан, а добијене информације враћа у меморију слике уз промену фокуса, тако да се комплетне 3Д информације могу добијена. Оштра слика интелигенције. Овом методом могуће је лако добити информације о облику површине које се не могу потврдити нормалним микроскопом. Поред тога, за обичне оптичке микроскопе, „повећање резолуције“ и „продубљивање дубине фокуса“ су контрадикторни услови, посебно при великим увећањима, ова контрадикција је израженија, али у погледу конфокалних микроскопа, овај проблем се лако решава.
2. Предности конфокалног оптичког система
Шематски дијаграм ласерског конфокалног микроскопа
Конфокални оптички систем врши осветљење тачке на узорку, а рефлектовану светлост такође прима тачкасти рецептор. Када се узорак постави у фокусну позицију, скоро сва рефлектована светлост може да стигне до фоторецептора, а када је узорак ван фокуса, рефлектована светлост не може да стигне до фоторецептора. То значи да ће у конфокалном оптичком систему бити приказана само слика која се поклапа са жаришном тачком, а светлосне тачке и бескорисно расејано светло ће бити заштићени.
3. Зашто користити ласер?
У конфокалном оптичком систему, узорак је осветљен у тачки, а рефлектовану светлост такође прима тачкасти фоторецептор. Стога, тачкасти извор светлости постаје неопходан. Ласери су веома тачкасти извори светлости. У већини случајева, ласерски извори светлости се користе као извори светлости за конфокалне микроскопе. Поред тога, карактеристике монохроматике, усмерености и одличног облика ласерског снопа такође су важни разлози за његово широко усвајање.
4. Посматрање у реалном времену засновано на скенирању велике брзине постаје могуће
За ласерско скенирање, акустички активирана оптичка отклонска јединица (Ацоустиц Оптицал Дефлецтор, АО елемент) се користи у хоризонталном правцу, а Серво Галвано-огледало се користи у вертикалном правцу. Пошто јединица за акусто-оптичко скретање нема део механичке вибрације, може да изврши скенирање великом брзином и могуће је посматрање на екрану монитора у реалном времену. Ово снимање велике брзине је веома важна ставка која директно утиче на брзину фокусирања и проналажења позиције.
5. Однос између положаја фокуса и осветљености
У конфокалном оптичком систему, осветљеност узорка је максимална када је узорак правилно постављен у фокусни положај, а његова светлост ће се нагло смањити пре и после њега (пуна линија на слици 4). Осетљива селективност фокалне равни је такође принцип одређивања правца висине конфокалног микроскопа и ширења фокалне дубине. Насупрот томе, обични оптички микроскопи немају значајне промене светлине пре и после позиције фокуса.
6. Висок контраст, висока резолуција
У обичним оптичким микроскопима, због интерференције рефлектоване светлости са фокусног дела, она се преклапа са делом за снимање фокуса, што резултира смањењем контраста слике. С друге стране, у конфокалном оптичком систему, расејана светлост изван фокусне тачке и расејана светлост унутар сочива објектива су скоро потпуно уклоњени, тако да се може добити слика са веома високим контрастом. Поред тога, пошто светлост два пута пролази кроз сочиво објектива, слика тачке се прво изоштрава, што такође побољшава моћ резолуције микроскопа.
7. Функција оптичке локализације
У конфокалном оптичком систему, рефлектована светлост осим тачке која се поклапа са жаришном тачком је заштићена микропором. Стога, када се посматра тродимензионални узорак, формира се слика као да је узорак пресечен жижном равни (слика 5). Овај ефекат је познат као оптичка локализација и једна је од специјалности конфокалних оптичких система.
8. Фокусирајте функцију мобилне меморије
Такозвана рефлектована светлост изван фокусне тачке је заштићена микропорама. С друге стране, може се сматрати да се све тачке на слици коју формира конфокални оптички систем поклапају са жаришном тачком. Стога, ако се тродимензионални узорак помера дуж З-осе (оптичке осе), слике се акумулирају и чувају у меморији, а на крају ће се добити слика формирана од целог узорка и фокусне тачке. Функција бесконачног продубљивања дубине фокуса на овај начин назива се функција мобилне меморије.
9. Функција мерења облика површине
У смислу функције померања фокуса, облик површине узорка се може мерити на бесконтактни начин додавањем кола за снимање висине површине. На основу ове функције могуће је снимити координате З-осе формиране максималном вредношћу осветљености у сваком пикселу и на основу ових информација могу се добити информације везане за облик површине узорка.
10. Високо прецизна мерна функција микро величине
Јединица за пријем светлости користи 1-димензионални ЦЦД сензор слике, тако да на њега не утиче нагиб уређаја за скенирање, тако да се мерење високе прецизности може завршити. Поред тога, због употребе функције меморије померања фокуса са подесивом дубином фокуса (продубљивање), грешка мерења узрокована померањем фокуса може бити елиминисана.
11. Анализа тродимензионалне слике
Користећи функцију мерења облика површине, можете лако да креирате тродимензионалну слику површине узорка. И не само то, већ може да изврши и разне анализе као што су: мерење храпавости површине, површина, запремина, површина, кружност, радијус, максимална дужина, периметар, центар гравитације, томографска слика, ФФТ трансформација, мерење ширине линије итд. .
Ласерски конфокални скенирајући микроскоп може се користити не само за посматрање морфологије ћелије, већ и за квантитативну анализу интрацелуларних биохемијских компоненти, статистику оптичке густине и мерење морфологије ћелије.
