Којим микроскопом се види облик микробних ћелија
Збирни назив за све сићушне организме које је појединцима тешко посматрати голим оком. Микроорганизми укључују бактерије, вирусе, гљивице и неколико алги. (Међутим, неки микроорганизми су видљиви голим оком, као што су печурке које припадају гљивама, Ганодерма луцидум, итд.) Вируси су врста „нећелијских организама“ састављених од неколико компоненти као што су нуклеинске киселине и протеини, али опстанак мора зависити од живих ћелија . Према различитим срединама које постоје, могу се поделити на прокариотске микроорганизме, свемирске микроорганизме, гљивичне микроорганизме, микроорганизме квасца, морске микроорганизме итд.
Улога и штета микроорганизама:
Један од најважнијих утицаја микроорганизама на људе је преваленција заразних болести. 50 одсто људских болести је узроковано вирусима. Историја микроба који изазивају људске болести је историја сталне борбе људских бића са њима. Људска бића су постигла велики напредак у превенцији и лечењу болести, али се и даље јављају нове микробне инфекције које се поново појављују, као што је велики број вирусних болести којима недостају ефикасни терапеутски лекови. Патогени механизам неких болести није јасан. Злоупотреба великог броја антибиотика широког спектра изазвала је снажан притисак селекције, узрокујући мутацију многих сојева, што доводи до појаве резистенције на лекове, а људско здравље је угрожено новим претњама. Неки сегментирани вируси могу мутирати рекомбинацијом или реасортацијом. Најтипичнији пример је вирус грипа.
Након познавања специфичне дефиниције микроорганизама, коју врсту микроскопа експериментатор треба да користи када проучава микроорганизме да би видео, и који микроскоп може да се користи да би се боље видело, и да би се посматрали и анализирали уобичајени микробни облици.
Проналазак микроскопа је да се могу видети насмејани предмети који се не могу видети голим оком. Величина микроорганизама је веома мала, па се морају увећати и посматрати уз помоћ микроскопа. Поред тога, постоји много врста микроорганизама, тако да у основи већина оптичких микроскопа може За посматрање микроорганизама, следеће питање је који тип микроскопа треба користити за посматрање и анализу микроорганизама. Уобичајени микроскопи за посматрање микробне морфологије укључују биолошке микроскопе, фазно контрастне микроскопе, инвертне микроскопе, флуоресцентне микроскопе и конфокалне микроскопе. Микроскоп и тако даље.
У наставку су описани различити микроскопи који се користе за посматрање микроорганизама:
1. Обичан светлосни микроскоп
Природна светлост или светлост се користи као извор светлости, а њена таласна дужина је око {{0}}.4 μм. Резолуција микроскопа је половина таласне дужине, односно 0.2 μм, а најмања слика видљива голим оком је 0.2 мм. Стога, коришћење уљног (имерзионог) огледала за увећање 1000 пута може повећати честице од 0,2 μм у 0,2 мм видљиве голим оком. Обични оптички микроскопи се могу користити за посматрање бактерија, актиномицета и гљивица.
2. Микроскопија тамног поља се обично користи за посматрање необаљене микробне морфологије и кретања. Након што се кондензатор тамног поља угради у обичан микроскоп, светлост не може продрети директно из средине, а видно поље је тамно. Када узорак прими косо светло са ивице кондензатора, може се распршити, тако да се у позадини тамног поља могу уочити светли микроорганизми као што су бактерије или спирохете.
3. Фазни контрастни микроскоп Фазни контрастни микроскоп користи светлосни ефекат плоче са фазном разликом да промени светлосну фазу и амплитуду директне светлости и претвори разлику светлосне фазе у разлику интензитета светлости. Под фазно-контрастним микроскопом, када светлост пролази кроз необојен узорак, разлика у светлосној фази је узрокована недоследношћу густине различитих делова узорка, а може се уочити морфологија, унутрашња структура и начин кретања микроорганизама.
4. Флуоресценцијски микроскоп Флуоресценцијски микроскоп је у основи исти као обични оптички микроскоп, главна разлика је извор светлости, филтер и кондензатор. Тренутно већина њих користи епи-лигхт уређаје, а као извори светлости се обично користе живине лампе високог притиска, које могу да емитују ултраљубичасто или плаво-љубичасто светло. Постоје две врсте филтера: филтер за узбуђење и филтер за апсорпцију. Поред општих кондензатора светлог поља, кондензатори тамног поља се такође могу користити у флуоресцентним микроскопима који користе плаво светло да би се побољшао контраст између флуоресценције и позадине. Ова метода је применљива на детекцију или идентификацију бактерија обојених флуоресцентним пигментима или комбинованих са флуоресцентним антителима.
5. Електронски микроскопи користе проток електрона као извор светлости. У поређењу са видљивом светлошћу, таласна дужина је десетине хиљада пута другачија, што значајно побољшава резолуцију. Магнетни калем се користи као систем оптичког појачања, а увећање може да достигне десетине хиљада или стотине хиљада пута. Често се користи у вирусним честицама. и посматрање ултраструктуре бактерија.
Посматрање необојених микробних узорака:
Необојени узорци се генерално могу користити за посматрање бактеријске морфологије, снаге и кретања. Бактерије су безбојне и провидне када нису обојене, а посматрају се под микроскопом углавном по разлици између индекса преламања бактерија и околног окружења. Бактерије са флагелама се крећу снажно, док бактерије без флагела показују неправилно Брауновско кретање. Одрживе бактерије као што су Трепонема паллидум, Лептоспира и Цампилобацтер имају карактеристичне облике и обрасце кретања, који су од дијагностичког значаја. Најчешће коришћене методе су метода пада притиска, метода пада привеска и капиларна метода.
1. Метода висеће капи Нанесите вазелин око конкавне рупе на чистом конкавном стакленом предмету, узмите прстен од бактеријске суспензије са петљом за инокулацију и ставите га у центар покривног стакла, а затим поравнајте конкавну рупу на конкавном стакленом предмету са капљицу у средини поклопног стакла и Ставите поклопац, а затим га брзо окрените, лагано притисните поклопац да се чврсто залепи за вазелин на ивици конкавне рупе, а затим посматрајте испод јаког микроскоп (или тамно поље).
2. Узмите прстен бактеријске суспензије са инокулационом петљом и ставите га у центар чистог стакленог стакалца методом пада притиска, и нежно покријте бактеријску суспензију покровним стаклом, водећи рачуна да избегнете стварање мехурића ваздуха и спречите бактеријска суспензија од преливања. Посматрање светлог поља (или тамног поља) под сочивом велике снаге.
3. Капиларна метода се углавном користи за испитивање кинетике анаеробних бактерија. Обично изаберите дужину од 60~70 мм. Након сифонирања суспензије анаеробних бактерија кроз капилару са отвором од 0.5-1.0 мм, затворите два краја капиларе пламеном. Капилара је фиксирана на стакло пластичним папиром и посматрана под сочивом велике снаге у тамном пољу.
Посматрање обојених микробних узорака под микроскопом:
Након што је бактеријски узорак обојен, због оштрог контраста у боји између бактерија и околног окружења, морфолошке карактеристике бактерија (као што су величина, облик, распоред, итд.) бактерија и неке посебне структуре могу се јасно посматрано под обичним оптичким микроскопом (као што су капсуле, флагеле, споре, итд.), а бактерије се могу класификовати и идентификовати према реактивности бојења.
(1) Општи поступак бактеријског бојења Општи поступак бактеријског бојења је: размазивање (сушење)—фиксација—бојење.
1. Размаз Припрема крви, секрета, излучевина, пункционе течности и течне културе и директне размазе танког филма на стакленим предметима; обдукције или заражених животињских ткива, размазати лезију памучним штапићем за узорковање. За припрему колонија бактерија или травњака на чврстој подлози, прво употребите петљу за инокулацију да узмете прстен нормалног физиолошког раствора и ставите га у центар стакалца, а затим употребите стерилну инокулациону петљу да узмете малу количину културе и самељете је равномерно у нормалном физиолошком раствору и распоредите га на 1цм2 Велике или мале фарбане површине, оставите да се природно осуши на собној температури или да се осуши полако на даљину.
2. Сврха фиксације је да убије бактерије, коагулира бактеријски протеин и структуру и олакша бојење; промовишу бактерије да се залепе за клизач како би се избегло испирање водом током прања; промените пропустљивост бактерија за боје, што је корисно за структуру бактеријских ћелија бојења. Обично се фиксира загревањем пламеном, а осушени размаз се брзо пропушта кроз пламен 3 пута. Боље је да не спалите кожу на задњој страни шаке када додирне клизач.
3. Бојење Према различитим сврхама инспекције, изаберите различите методе бојења за бојење. Приликом бојења додајте раствор боје кап по кап да бисте повећали покривеност.
4. Бојдинг Свака супстанца која може да појача афинитет између боје и обојеног предмета, фиксира боју на обојени предмет и изазове промену пропустљивости ћелијске мембране назива се једка. Обично се користе стипса, танинска киселина, соли метала и јод, итд., а загревање се такође користи за промовисање бојења. Бојалице се могу користити између примарног бојења и противбоје, а могу се користити и након фиксирања или садржане у фиксативу и бојењу.
5. Деколоризација Сваки хемијски агенс који може уклонити боју обојеног предмета назива се деколоризатор. Као деколоризатори се обично користе етанол, ацетон итд. Средство за деколоризацију може открити степен стабилности комбинације бактерија и боја, које се могу користити за диференцијално бојење.
6. Противбојно бојење Бактерије или њихове структуре које су обезбојене често се противбоје раствором против бојења ради лакшег посматрања. Боја раствора против бојења се разликује од боје примарног раствора за бојење да би се формирао оштар контраст. Противбојење не би требало да буде прејако, да не би прикрило боју почетног бојења.
