Зашто нам је потребан конфокални микроскоп?
1. Након напора и побољшања наших великих претходника, оптички микроскоп је достигао савршен ниво. У ствари, обични микроскопи нам могу пружити прелепе микроскопске слике једноставно и брзо. Међутим, десио се догађај који је донео револуционарну иновацију у овај скоро савршен свет микроскопа, а то је проналазак „конфокалног микроскопа за ласерско скенирање“. Карактеристика овог новог типа микроскопа је да усваја оптички систем који само издваја информације о слици са површине на којој је концентрисан фокус. Променом фокуса док се добијене информације враћају у меморију слике, може се добити живописна слика са потпуном тродимензионалном информацијском интелигенцијом. Овом методом се лако могу добити информације о облику површине које се не могу потврдити конвенционалним микроскопима. Поред тога, за типичне оптичке микроскопе, „побољшање резолуције“ и „продубљивање фокусне дубине“ су контрадикторни услови, посебно при великом увећању. Међутим, у конфокалним микроскопима, овај проблем се лако решава.
2. Предности конфокалних оптичких система
Шематски дијаграм ласерског конфокалног микроскопа
Конфокални оптички систем се користи за осветљавање узорка тачкама, док рефлектовану светлост прима и тачкасти сензор. Када се узорак постави у жаришну тачку, скоро сва рефлектована светлост може доћи до фотоосетљивог уређаја. Када узорак одступи од фокусне тачке, рефлектована светлост не може доћи до фотоосетљивог уређаја. То ће рећи, у конфокалном оптичком систему, само слике које се поклапају са жаришном тачком ће се емитовати, а светлосна тачка и бескорисно расејано светло ће бити заштићени.
Зашто користити ласер?
У конфокалном оптичком систему, узорак је осветљен, а рефлектовану светлост такође прима сензор тачке. Због тога постају неопходни тачкасти извори светлости. Ласер је веома тачан извор светлости. У већини случајева, извор светлости конфокалног микроскопа је ласерски извор светлости. Поред тога, монохроматичност, усмереност и одличан облик зрака ласера су такође важни разлози за њихово широко усвајање.
4. Посматрање у реалном времену засновано на скенирању велике брзине постаје могуће
Ласерско скенирање користи акустични оптички дефлектор (АО приме) у хоризонталном правцу и Серво Галвано огледало у вертикалном смеру. Због одсуства механичких вибрација у аудио оптичкој јединици, могуће је извршити скенирање великом брзином и посматрање у реалном времену на екрану за праћење. Природа велике брзине ове врсте камере је веома важна ставка која директно утиче на брзину фокусирања и проналажења позиције.
5. Однос између фокусног положаја и осветљености
У конфокалном оптичком систему, осветљеност узорка је велика када је правилно постављен у фокусну позицију, а његова осветљеност нагло опада пре и после њега (пуна линија на слици 4). Осетљива селективност ове фокалне равни је управо принцип који стоји иза одређивања правца висине и проширења фокалне дубине у конфокалној микроскопији. У поређењу са овим, типични оптички микроскопи не показују значајне промене светлине пре и после фокусног положаја (испрекидана линија на слици 4).
6. Висок контраст и резолуција
Обично се у оптичким микроскопима јавља рефлектована светлост која одступа од жаришне тачке
