Зашто је увећање уљног сочива веће од увећања обичног објектива?
Разлози због којих се бактерије морају поправити пре бојења у микробиолошким експериментима:
1: Убија ћелије, лако се боји бојом.
2: Учините да се бактерије залепе за стакло, и није лако да се испере водом.
Приликом фиксирања треба га полако сушити. Ако заиста желите да убрзате, можете га осушити неколико пута у даљини изнад пламена алкохолне лампе. Не дозволите да се стаклени клизач загреје, иначе може уништити животни облик бактерија.
Бојење по Граму и микроскопско посматрање бактерија
1. Експериментални принцип
Принцип бојења по Граму: Бактерије различито реагују на бојење по Граму због састава и структуре њихових ћелијских зидова. Ћелијски зид Грам-позитивних бактерија је углавном мрежасти чвор формиран од пептидогликана. Када се третира етанолом, величина пора мрежне структуре постаје мања услед дехидрације, а пропустљивост се смањује, тако да комплекс кристално љубичасто-јод супстанца није лако елуирана и задржана у ћелији, а плаво- љубичаста боја примарног средства за бојење је и даље задржана након деколоризације и противбоје. Пептидогликански слој ћелијског зида грам-негативних бактерија је танак и висок садржај липида, па се када се изврши третман деколоризације липид раствара етанолом (или ацетоном) и повећава се пропустљивост ћелијског зида, па се да је комплекс кристално љубичасто-јод Лакше се елуира, а након контрабоје контрабојом ћелије се боје црвеном бојом контрабоја. Принцип снимања микроскопа: Модерни обични оптички микроскопи користе два система сочива окулара и објектива за увећање слике, па се често називају сложеним микроскопом. У оптичком систему микроскопа најкритичнији је учинак сочива објектива, а највеће је увећање уљног сочива, што је најважније за микробиолошка истраживања. Главна сврха додавања имерзионог уља између стакла и сочива је да се повећа осветљеност осветљења и повећа резолуција микроскопа. Уље се користи уместо ваздуха као медијум за пренос светлости да би се смањила рефракција или укупна рефлексија светлости и учинила посматрана слика јаснија.
2. Експериментална опрема
1. Колоније:
Есцхерицхиа цоли 24х хранљива агар култура,
Стапхилоцоццус ауреус око 24-часовне хранљиве агар културе, Бациллус субтилис 12-18х хранљива агар култура.
2. Раствори или реагенси:
Дестилована вода, раствор јода, раствор за бојење кристално љубичасте боје, 95 процената алкохола, раствор за бојење сафранина, кедрово уље. 3. Инструмент:
Микроскоп, предметно стакло, петља за инокулацију, алкохолна лампа, пинцета, ткиво за сочива.
3. Експериментални кораци
a:
1. Размазати
Извадите стакалцу, запалите тобоган, сагорејте алкохол на стакалцу и стерилишите га, ставите малу кап дестиловане воде у средину, користите петљу за инокулацију да нежно покупите малу количину бактерија на косој подлози теста епрувета, Током целог процеса, отвор епрувете треба да буде изнад алкохолне лампе, а брзина треба да буде велика да спречи контаминацију медијума за културу. Затим кружним покретима размажите мале капљице воде по стакалцу, зауставите се када су капљице воде замућене и сачекајте да се осуше и поправе.
2. Примарно бојење
Нанесите кристално љубичасту боју (прикладно је да се само прекрије бактеријски филм) на колонију, обојите 1-2 минута, одлијте раствор за бојење и исперите фином водом са врха стакалца док елуат не постане безбојан, и ставите мрљу на тобоган. Отресите воду на кришкама.
3. Мордант
Додати раствор јода кап по кап да се испере заостала вода, поклопити око 1 мин и испрати водом.
4. Деколоризација
Отресите воду са стакленог тобогана, нагните тобоган и додајте 95 посто алкохола да бисте га обезбојили испод беле позадине, све док алкохол који излази не постане плав, одмах исперите алкохол водом и ставите стаклену плочицу Протресите од воде на кришкама.
5. Контрабојање
Противбојите раствором сафранина око 1-2 минута, оперите водом, а затим осушите упијајућим папиром
6. Микроскопски преглед:
Потражите колонију бактерија коју треба посматрати испод сочива са малим увећањем (наставите да померате клизач, ако осетите црвену сенку, одмах зауставите, подесите увећање, ако није колонија, наставите да пронађете), подигните цев сочива, а затим пређите на уљно огледало. Додајте кап кедровог уља на подручје узорка и пажљиво спустите цијев сочива помоћу грубог подешавања тако да уљно сочиво буде уроњено у уље и скоро додирује узорак. Подигните кондензатор на највишу позицију и потпуно отворите отвор бленде, користите грубо подешавање да полако подигните цијев сочива док се слика објекта не појави у видном пољу и користите фино подешавање да бисте је учинили јасним и у фокусу.
