Припрема биолошких узорака и посматрање помоћу електронских микроскопа
Резолуција микроскопа зависи од таласне дужине светлости која се користи. Електронски микроскоп, који се појавио 1933. године, користи електронске зраке са много краћом таласном дужином од видљиве светлости као извор светлости. Ово значајно побољшава његову резолуцију у поређењу са оптичким микроскопима. Разлике у изворима светлости такође доводе до низа разлика између електронских и оптичких микроскопа.
На основу разлика у принципима снимања електронским снопом и начинима на који сноп интерагује са узорцима, савремени електронски микроскопи су еволуирали у многе типове. Најчешће коришћени су трансмисиони електронски микроскопи (ТЕМ) и скенирајући електронски микроскопи (СЕМ). Укупно увећање ТЕМ може да се креће од 1000 до 1 000 000 пута, док се СЕМ креће од 20 до 300 000 пута. Овај експеримент углавном уводи припрему узорака за трансмисионе електронске микроскопе и скенирајуће електронске микроскопе.
ИИ. Апарати и материјали
сој:Есцхерицхиа цолинагнута култура
Раствори и реагенси: Формвар, концентрована сумпорна киселина, апсолутни етанол, стерилна вода, 2% водени раствор натријум фосфотунгстата (пХ 6,5–8,0), 0,3% раствор поливинил формалног (растворен у хлороформу), цитохром Ц, амонијум пБР32 ацетат, плас2.
Инструменти и потрошни материјал: Конвенционални оптички микроскоп, бакарне решетке, Бухнеров левак, чаша, петријева посуда, стерилна капаљка, стерилне пинцете, игла за сецирање, предметно стакло, хемоцитометар, вакуумски испаривач, сушач на критичној тачки итд.
ИИИ. Оперативне процедуре
(1) Припрема узорка и посматрање за трансмисијску електронску микроскопију
Обрада металних решетки Узорци за оптичку микроскопију се посматрају на стакленим предметима. However, for transmission electron microscopy, electrons cannot penetrate glass, so mesh substrates, commonly known as specimen grids, are used instead. Мреже узорака су доступне у различитим спецификацијама у зависности од материјала и облика. Бакарне решетке од 200–400 месх су најчешће коришћене. Copper grids must be cleaned before use to remove contaminants, otherwise the quality of supporting films and the clarity of specimen micrographs will be affected. This experiment adopts 400-mesh copper grids, treated as follows: first soak in Formvar solution for several hours, rinse repeatedly with distilled water, then dehydrate by soaking in absolute ethanol. If the grids remain dirty after the above steps, soak them in diluted concentrated sulfuric acid (1:1) for 1–2 minutes, or boil them in 1% NaOH solution for several minutes. Темељно исперите дестилованом водом, дехидрирајте у апсолутном етанолу и оставите по страни за каснију употребу.
