Повећање предности ласерске скенирајуће мултифотонске микроскопије
Ласерска скенирајућа мултифотонска микроскопија је велико побољшање у односу на оптичку микроскопију. Може да посматра дубоку структуру живих ћелија, фиксних ћелија и ткива, и може да добије јасне и оштре вишеслојне структуре З-равни, односно оптичке пресеке, од којих може да конструише тродимензионалну чврсту структуру узорка. Конфокална микроскопија користи ласерски извор светлости који, након експанзије, испуњава целу задњу жижну раван сочива објектива, а затим пролази кроз систем сочива сочива објектива да би конвергирао у веома малу тачку на фокалној равни узорка. У зависности од нумеричког отвора сочива објектива, пречник најсветлије тачке осветљења је око 0.25 ~ 0.8μм, а дубина је око 0.5 ~ 1.5μм . Величина конфокалне тачке зависи од дизајна микроскопа, таласне дужине ласера, карактеристика сочива објектива, подешавања статуса јединице за скенирање и својстава узорка. Микроскопија поља има велики опсег и дубину осветљења, док конфокална микроскопија има фокусирано осветљење фокусирано на жаришну тачку у фокалној равни. Најосновнија предност конфокалне микроскопије је у томе што може да изврши фино оптичко сечење дебелих флуоресцентних узорака (који могу достићи 50 μм или више), а дебљина пресека је око 0,5 до 1,5 μм. Низ слика оптичког пресека може се добити померањем узорка горе-доле помоћу корачног мотора микроскопа на З-оси. Прикупљање информација о слици се контролише унутар равни и неће бити ометано сигналима емитованим са других локација на узорку. Након уклањања утицаја позадинске флуоресценције и повећања односа сигнал-шум, контраст и резолуција конфокалних слика су значајно побољшани у поређењу са традиционалним флуоресцентним сликама осветљеним пољем. У многим примерцима, многе сложене структурне компоненте су испреплетене да формирају сложене системе, али када се прикупи довољно оптичких делова, можемо их реконструисати у три димензије помоћу софтвера. Овај експериментални метод се широко користи у биолошким истраживањима да би се разјаснили сложени структурни и функционални односи између ћелија или ткива.
