Разлике и карактеристике флуоресцентног микроскопа и обичног оптичког микроскопа
Флуоресцентни микроскоп и обични оптички микроскоп се разликују, не посматра се узорак кроз осветљење обичног извора светлости, већ коришћење одређене таласне дужине светлости (обично ултраљубичасто, плаво-љубичасто светло) ексцитација флуоресцентног материјала унутар узорка под микроскопом, тако да флуоресценција извора светлости флуоресцентног микроскопа не игра директно осветљење, већ као врста ексцитације флуоресцентног материјала унутар узорка извора енергије. Разлог зашто можемо да посматрамо узорак није због осветљења извора светлости, већ феномена флуоресценције који представља флуоресцентни материјал у узорку након апсорбовања светлосне енергије ексцитације. Може се видети да карактеристике флуоресцентног микроскопа, углавном његовог извора светлости, могу да обезбеде велики број специфичних опсега таласних дужина ексцитационог светла, тако да флуоресцентни материјал унутар испитиваног узорка може да добије потребан интензитет ексцитационог светла. Истовремено, флуоресцентни микроскоп мора имати одговарајући систем филтера. Флуоресцентни микроскоп је основни алат за флуоресцентну хистохемију. Састоји се од извора светлости ултра-високог притиска, система филтера (укључујући филтерску плочу за побуђивање и потискивање), оптичког система и фотографског система и других главних компоненти, је употреба одређене таласне дужине светлости да стимулише узорак да емитује флуоресценцију.
1. начин ексцитације флуоресценције: према опсегу таласне дужине светлости подељен је на метод УВ ексцитације (користећи ултраљубичасто осветљење) и БВ метод ексцитације (користећи плаво љубичасто светло) две врсте методе УВ ексцитације су краће од 400нм близу ултраљубичастог светла за узбуђење. У овој методи нема видљиве ексцитационе светлости, тако да посматрана флуоресценција показује инхерентну флуоресценцију боје и лако је разликовати специфичну флуоресценцију на узорку од самофлуоресценције позадинског ткива.
2. БВ метода ексцитације: Метода је усредсређена на 404нм, 434нм од ултраљубичастог до плавог светла за ексцитацију. Ова метода користи плаво светло за озрачивање узорка, тако да гранични филтер система за посматрање флуоресценције мора да користи филтер који може у потпуности да блокира плаво светло и може адекватно да прође жељену зелену и жуту флуоресценцију. Флуоресцентни пигменти за методу флуоресцентних антитела. Пошто су таласна дужина максималне апсорпције ексцитационог светла и таласна дужина максималне емисије флуоресценције блиске једна другој, филтери који се користе у методи БВ ексцитације морају бити оштри филтери за одсецање. Ова метода користи плаво светло као побудно светло, тако да је ефикасност апсорпције флуорохрома већа и може се добити светлија слика. Недостатак је што се флуоресценција испод 500 нм не може видети, а изнад 500 нм цела слика изгледа жуто. У методи флуоресцентног антитела, већина специфичности се процењује на основу јединствене боје флуорохрома, тако да недостаци методе ексцитације БВ која је горе описана имају тенденцију да буду изузетно утицајни када се говори о суптилној специфичности.
