Метода детекције флуоресцентне микроскопије
флуоресцентни микроскоп
Флуоресцентна микроскопија је основни алат за имунофлуоресцентну цитохемију. Састоји се од главних компоненти као што су извор светлости, систем филтерских плоча и оптички систем. Користи одређену таласну дужину светлости да побуђује узорак и емитује флуоресценцију, која се увећава кроз систем објектива и окулара да би се посматрала флуоресцентна слика узорка (слика 1).
(1) Извор светлости
Данас се као извор светлости обично користи живина лампа од 200В ултра високог притиска. Направљен је од кварцног стакла, са сферним обликом у средини и одређеном количином живе пуњене унутра. Током рада, пражњење између две електроде изазива испаравање живе, а притисак унутар сфере брзо расте. Када жива потпуно испари, може да достигне 50-70 стандардне атмосферске притиске, што обично траје око 5-15 минута. Луминисценција живиних лампи ултра високог притиска је резултат пражњења између електрода, које непрекидно дисоцира и смањује молекуле живе и емитује фотоне. Емитује јако ултраљубичасто и плавољубичасто светло, што је довољно да побуди различите флуоресцентне супстанце, па се широко користи у флуоресцентним микроскопима.
Мере предострожности за коришћење флуоресцентног микроскопа
(1) Стриктно следите упутства фабрике флуоресцентног микроскопа и не мењајте програм произвољно.
(2) Преглед се врши у мрачној просторији. Након што уђете у мрачну просторију, прикључите напајање и упалите живину лампу ултра високог притиска на 5-15 минута. Након што извор светлости емитује јако светло и стабилизује се, очи би требало да се потпуно прилагоде мрачној просторији пре него што почну да посматрају узорак.
(3) Да бисте спречили УВ оштећење очију, треба носити заштитне наочаре приликом подешавања извора светлости.
(4) Време инспекције би требало да буде 1-2 сати сваки пут. Ако прелази 90 минута, интензитет светлости живине лампе ултра високог притиска постепено се смањује и флуоресценција слаби; Узорци изложени ултраљубичастом зрачењу 3-5 дана
После мин, флуоресценција се такође значајно смањила; Дакле, максимално трајање не би требало да прелази 2-3 сати.
(5) Животни век извора светлости флуоресцентног микроскопа је ограничен, а узорак треба централно прегледати да би се уштедело време
Уштедите време и заштитите извор светлости. Када је топло време, треба додати електрични вентилатор да би се распршила топлота и охладила. Приликом замене нове сијалице време коришћења треба бележити од почетка. Када је светло искључено и желите да га поново користите, морате сачекати да се сијалица довољно охлади пре него што је упалите. Избегавајте паљење извора светлости неколико пута дневно.
(6) Посматрајте узорак одмах након бојења, пошто ће флуоресценција временом постепено слабити. Ако се узорак чува у полиетиленској пластичној кеси на 4 степена, то може одложити време слабљења флуоресценције и спречити испаравање средства за монтажу.
(7) Критеријуми за процену осветљености флуоресценције су генерално подељени на четири нивоа, односно „један“ – никаква или видљива слаба флуоресценција. „+“ – Видљива је само видљива флуоресценција. ++- Видљиво са јаком флуоресценцијом. „+++“ – Видљива и заслепљујућа флуоресценција.
