Како се флуоресцентна микроскопија разликује од конфокалне ласерске микроскопије
Флуоресцентни микроскоп
1. Флуоресцентни микроскоп користи ултраљубичасто светло као извор светлости да осветли објекат који се прегледа да би емитовао флуоресценцију, а затим посматра облик и локацију објекта под микроскопом. Флуоресцентна микроскопија се користи за проучавање апсорпције и транспорта супстанци унутар ћелија, као и дистрибуцију и позиционирање хемијских супстанци. Неке супстанце у ћелијама, као што је хлорофил, могу да флуоресцирају након зрачења ултраљубичастим зрацима; неке супстанце саме по себи не могу да флуоресцирају, али ако су обојене флуоресцентним бојама или флуоресцентним антителима, могу флуоресцирати након зрачења ултраљубичастим зрацима. Флуоресцентна микроскопија је један од алата за квалитативна и квантитативна истраживања таквих супстанци.
2. Принцип флуоресцентног микроскопа:
(А) Извор светлости: Извор светлости зрачи светлост различитих таласних дужина (од ултраљубичастог до инфрацрвеног).
(Б) Извор светлости ексцитационог филтера: преноси светлост одређене таласне дужине која може да изазове флуоресценцију узорка, док блокира светлост која је бескорисна за стимулисање флуоресценције.
(Ц) Флуоресцентни узорци: Углавном су обојени флуоресцентним пигментима.
(Д) Филтер за блокирање: блокира ексцитацијско светло које узорак не апсорбује и селективно преноси флуоресценцију. Неке таласне дужине у флуоресценцији се такође селективно преносе. Микроскоп који користи ултраљубичасто светло као извор светлости да изазове флуоресценцију осветљеног објекта. Електронски микроскоп је први пут састављен 1931. године у Берлину, у Немачкој, од стране Кнора и Халовске. Овај микроскоп користи брзи електронски сноп уместо светлосног зрака. Пошто је таласна дужина протока електрона много краћа од таласне дужине светлости, увећање електронског микроскопа може да достигне 800,000 пута, а минимална граница резолуције је 0,2 нанометра. Скенирајући електронски микроскоп, који је почео да се користи 1963. године, омогућава људима да виде сићушне структуре на површини објеката.
3. Обим примене: Користи се за повећање слика малих објеката. Обично се користи у посматрању биологије, медицине, микроскопских честица итд.
конфокални микроскоп
1. Конфокални микроскоп додаје полурефлектујућу полу-сочиво на оптичку путању рефлектоване светлости, која рефлектује светлост која је прошла кроз сочиво у другим правцима. У фокусу се налази преграда са рупом, а рупица се налази. У фокусној тачки, иза преграде, налази се фотоумножачка цев. Може се замислити да рефлектована светлост пре и после детекције светлосног фокуса пролази кроз овај конфокални систем и не може да се фокусира на малу рупу, и да ће бити блокирана преградом. Дакле, оно што фотометар мери је интензитет рефлектоване светлости у фокусу.
2. Принцип: Традиционални оптички микроскопи користе изворе светлости на терену, а слика сваке тачке на узорку ће бити ометана дифракцијом или расејаном светлошћу из суседних тачака; конфокални микроскопи за ласерско скенирање користе ласерске зраке да формирају тачкасте изворе светлости кроз отворе за осветљење да би осветлили унутрашњост узорка. Свака тачка фокалне равни се скенира, а осветљена тачка на узорку је снимљена на отвору за детекцију, коју прима тачку по тачку или линију по линију помоћу фотомултипликаторске цеви (ПМТ) или уређаја за хладно спајање (цЦЦД) иза детекције. пинхоле, и брзо се формира флуоресцентна слика на екрану монитора рачунара. Рупа за осветљење и рупица за детекцију су коњуговани у односу на жижну раван сочива објектива. Тачке на жижној равни су истовремено фокусиране на отвор за осветљење и на отвор за емитовање. Тачке изван жижне равни неће бити снимљене на отвору за детекцију. Ово се добија Конфокалне слике су оптички пресеци узорака, који превазилазе недостатке мутних слика у обичним микроскопима.
3. Области примене: Укључују медицину, научна истраживања животиња и биљака, биохемију, бактериологију, ћелијску биологију, ембриологију ткива, науку о храни, генетику, фармакологију, физиологију, оптику, патологију, ботанику, неуронауку, биологију мора и науку о материјалима, електронску науку , механика, геологија нафте, минералогија.
