Како изабрати између инвертног микроскопа и флуоресцентног микроскопа?
Микроскоп је важан инструмент у ћелијској култури и сродним експериментима са дериватима. Тренутно на тржишту постоје различите врсте микроскопа, а избор микроскопа који одговара потребама и одговара је изазов. У наставку ћемо представити принципе инвертираних микроскопа и флуоресцентних микроскопа за свакога од кога ће изабрати.
Обрнути микроскоп, као и обичан микроскоп, углавном се састоји од три дела: механичког дела, дела за осветљење и оптичког дела. Састав инвертованог микроскопа је исти као и код обичног усправног микроскопа, осим што су сочиво објектива и систем осветљења обрнути, при чему је прво испод бине, а друго изнад позорнице. Ова структура значајно проширује ефективно растојање између система рефлектора за осветљење и бине, олакшавајући постављање дебљих алата за посматрање као што су посуде за културу и боце са ћелијском културом (наравно, могу се користити и стаклене плочице), док је радна удаљеност између објектив објектива и материјал не мора да буде веома велики. Инвертирани микроскоп користе медицинске и здравствене установе, универзитети и истраживачки институти за посматрање микроорганизама, ћелија, бактерија, култура ткива, суспензија, седимената итд. Може континуирано посматрати процес пролиферације и деобе ћелија и бактерија у медијуму за културу, и може ухватити било који облик овог процеса. Широко се користи у областима као што су цитологија, паразитологија, онкологија, имунологија, генетски инжењеринг, индустријска микробиологија и ботаника.
Флуоресцентна микроскопија се користи за проучавање апсорпције, транспорта, дистрибуције и локализације супстанци унутар ћелија. За тестирани објекат постоје два начина за генерисање флуоресценције: спонтана флуоресценција, која се директно емитује ултраљубичастим зрачењем; Секундарна флуоресценција настаје када се посматрани објекат третира флуоресцентним бојама и изложи ултраљубичастом светлу пре емитовања флуоресценције. Неке супстанце у ћелијама, као што је хлорофил, производе спонтану флуоресценцију након што су изложене ултраљубичастом зрачењу; Неке супстанце можда не емитују флуоресценцију, али ако су обојене флуоресцентним бојама или флуоресцентним антителима, могу да емитују и секундарну флуоресценцију под ултраљубичастим зрачењем. Флуоресцентни микроскоп користи тачкасти извор светлости високе светлосне ефикасности да емитује одређену таласну дужину светлости (УВ 365нм или УВ плаво 420нм) кроз систем за филтрирање боја као ексцитационо светло, које побуђује флуоресцентне супстанце у узорку да емитују различите боје флуоресценције. Након тога се посматра кроз увећање сочива објектива и окулара. На овај начин, чак и са слабом флуоресценцијом, лако је препознатљив и веома осетљив под јаким контрастним позадинама. Углавном се користи за проучавање ћелијске структуре, функције и хемијског састава.
Флуоресцентна микроскопија се може поделити на два типа: трансмисиони тип и падајући тип. Први је примитивнији, док је други напреднији. Основна конструкција ова два типа флуоресцентних микроскопа је слична, са главном разликом у томе што пропуштено ексцитационо светло пролази кроз узорак, стварајући флуоресценцију у целини. Флуоресценција тада улази у сочиво објектива, а што је веће увећање, флуоресценција је слабија; Падајуће побудно светло пројектује се на површину узорка, производећи флуоресценцију која улази у сочиво објектива. Што је веће увећање, то је јача флуоресценција, што га чини погодним за посматрање велике снаге. Главне компоненте флуоресцентног микроскопа укључују извор светлости живине лампе, ексцитациони филтер плочу, спектрофотометар (тип капи), супресиону филтерску плочу и кондензатор тамног поља (преносни тип). Поред тога, због јаког загревања живиних лампи, већина њих је такође опремљена филтерима који апсорбују топлоту. Неки флуоресцентни микроскопи такође имају фазни контрастни објектив и кружни отвор, што омогућава посматрање фазног контраста. Неки флуоресцентни микроскопи усвајају обрнуту структуру, која је такође обрнути микроскоп, и тако даље.
Поред тога, горепоменути микроскопи се могу склопити у дигиталне микроскопе инсталирањем ЦЦД-а, који претвара физичке слике које микроскоп види у дигиталне аналогне слике и слика их на рачунару. Као резултат, можемо да померимо наше истраживање у микро пољу са традиционалног бинокуларног посматрања на репродукцију путем дисплеја, чиме се побољшава радна ефикасност.
