Мерење микробне количине - микроскопска метода директног бројања!
Раст популација бактерија карактерише повећање броја ћелија или повећање ћелијског материјала. Постоји неколико метода за мерење броја ћелија, укључујући директан микроскопски број, број плоча, турбометрију спектрофотометром, највероватнији број МПН и мембранску филтрацију. Методе за мерење ћелијских супстанци обухватају мерење суве тежине ћелије, мерење садржаја одређених компоненти ћелија као што су азот, РНК и ДНК и мерење метаболичких производа. Укратко, постоји много метода за мерење микробног раста, свака има своје предности и мане, а избор треба да се заснива на специфичним захтевима у раду. Овај експеримент углавном уводи најчешће коришћену микроскопску методу директног бројања у производњи и научноистраживачком раду.
Захтеви за намену
1. Појасните принцип коришћења плоче за бројање крвних зрнаца за бројање.
2. Савладајте методу коришћења плоче за бројање крвних зрнаца за бројање микроба.
2, Основни принципи
Микроскопска метода директног бројања је једноставна, брза и интуитивна метода директног бројања мале количине суспензије узорка под микроскопом тако што се ставља на посебно стакло са одређеном површином и запремином (познато и као бројач бактерија). Тренутно, најчешће коришћени уређаји за бројање бактерија у земљи и иностранству укључују плоче за бројање крвних зрнаца, Петерофф Хаусер уређаје за бројање бактерија и Хавкслеи уређаје за бројање бактерија, који се сви могу користити за бројање суспензија квасца, бактерија, спора гљивица, итд. са истим основним принципом. Последња два типа бројача бактерија имају укупну запремину од {{0}}.02 мм3 након што су покривени покривним стаклом, а растојање између покривног стакла и носећег клизача је само 0,02 мм. Због тога се објектив за урањање у уље може користити за посматрање и бројање мањих ћелија као што су бактерије. Поред коришћења ових бројача бактерија, постоји и метода процене за директно посматрање односа површине размаза и површине поља под микроскопом, која се углавном користи за бактериолошко испитивање млека. Предности директног бројања са микроскопом су интуитивне, брзе и једноставне за руковање. Али недостатак ове методе је што су мерени резултати обично збир мртвих и живих ћелија. Тренутно постоје неке методе које могу да превазиђу овај недостатак, као што је комбиновање културе коморе за бојење живих ћелија (кратко време) и додавање инхибитора ћелијске деобе да би се постигао циљ само бројања живих ћелија.
Коришћење плоче за бројање крвних зрнаца као примера за директно бројање под микроскопом. Методе употребе друга два бројача бактерија могу се наћи у приручницима различитих произвођача. Директно бројање под микроскопом помоћу плоче за бројање крвних зрнаца је уобичајена метода за бројање микроба. Табла за бројање је посебно направљен стаклени тобоган са четири жлеба који формирају три платформе на њему; Шира платформа у средини је кратким хоризонталним жлебом подељена на две половине, а са сваке стране платформе је решетка. Свака мрежа је подељена на девет великих мрежа, а велика мрежа у средини је соба за бројање. Структура плоче за бројање крвних зрнаца приказана је на слици л{{0}}. Скала собе за бројање генерално има две спецификације. Један је да је велики квадрат подељен на 25 средњих квадрата, а сваки квадрат је даље подељен на 16 малих квадрата (слика 15-2); Други метод је да се велики квадрат подели на 16 средњих квадрата, а сваки квадрат се даље дели на 25 малих квадрата. Међутим, без обзира на величину плоче за бројање, у сваком великом квадрату има 400 малих квадрата. Ако је дужина странице сваког квадрата 1 мм, површина сваког великог квадрата је лмм2. Након прекривања покривним стаклом, висина између поклопног стакла и стакала је 0,1мм, па је запремина собе за бројање 0,1мм3 (хиљадити део милилитра). Слика 15-1 Структура табле за бројање крвних ћелија (И) Слика 15-2 Структура табле за бројање крвних ћелија (ИИ) Поглед спреда; Б. Вертикални пресек; Увећана мрежа има велики квадрат у средини као просторију за бројање 1. Табла за бројање крвних зрнаца; 2. Поклопно стакло; Приликом бројања у просторији за бројање, укупан број бактерија се обично израчунава за пет квадрата, затим се добија просечна вредност сваког квадрата, помножена са 25 или 16 да би се добио укупан број бактерија у великом квадрату, који се затим претвара у укупан број бактерија у лмл раствора бактерија. Уз претпоставку да је укупан број бактерија у пет квадратних мрежа А и фактор разблажења бактеријског раствора Б. Ако у квадратној мрежи има 25 плоча за бројање, укупан број бактерија у 1 мЛ раствора бактерија је А/5 × 25 × 104 × Б=50000А · Б. Слично, ако постоји 16 плоча за бројање у квадратној мрежи, укупан број бактерија у 1мЛ бактеријског раствора је А/5 × 16 × 104 × Б=32000А · Б
