Припрема и посматрање биолошких узорака за електронску микроскопију
Резолуција микроскопа зависи од таласне дужине светлости која се користи. Електронски микроскоп, који је почео да се појављује 1933. године, користи електронски сноп са таласном дужином много краћом од оне видљиве светлости као извор светлости, тако да је резолуција коју може да постигне знатно побољшана у поређењу са оптичким микроскопом. Разлика у изворима светлости такође одређује низ разлика између електронских и оптичких микроскопа.
У складу са разликама у принципима снимања електронским снопом и различитим начинима деловања на узорке, савремени електронски микроскопи су се развили у многе типове. Тренутно се најчешће користе трансмисиони електронски микроскопи и скенирајући електронски микроскопи. Укупно увећање првог може бити између 1000-1000000. Укупно увећање последњег може да варира између 20 и 300,000 пута. Овај експеримент углавном уводи припрему две врсте микроскопских узорака, трансмисионог електронског микроскопа и скенирајућег електронског микроскопа.
2. Опрема
1. Бактерије Есцхерицхиа цоли (Есцхерицхиа цоли) коси.
2. Раствор или реагенс амил ацетат, концентрована сумпорна киселина, апсолутни етанол, стерилна вода, 2% натријум фосфотунгстата (пХ 6.5-8.0) водени раствор, 0.3% полиетилен раствор формалдехида (растворљив у хлороформу), ћелије Пигмент ц, амонијум ацетат, плазмид пБР322.
3. Инструменти или други прибор: обични оптички микроскоп, бакарна мрежа, порцелански левак, чаша, посуда, стерилна капаљка, стерилне пинцете, игле, слајдови, плоча за бројање, машина за вакуумско облагање, сушач за критичну тачку итд.
3. Оперативни кораци
(1) Припрема узорка и посматрање за трансмисијску електронску микроскопију
1. Третман металне мреже
Узорак за оптичку микроскопију ставља се на стакло за посматрање. Међутим, у трансмисионој електронској микроскопији, пошто електрони не могу да продру кроз стаклени лист, мрежасти материјали се могу користити само као носачи, који се обично називају носећим мрежама. Носећа мрежа се може поделити на много различитих спецификација због различитих материјала и облика, међу којима је најчешће коришћена 200-400 мрежа (број рупа) бакарна мрежа. Бакарна мрежа мора бити третирана пре употребе како би се уклонила прљавштина и одржала чистом, иначе ће утицати на квалитет потпорног филма и јасноћу фотографија узорка. У овом експерименту се користи 400- мрежаста бакарна мрежа, која се може третирати на следећи начин: прво је потопите и избелите амил ацетатом неколико сати, затим је исперите дестилованом водом неколико пута, а затим потопите у апсолутни етанол за дехидрација. Ако бакарна мрежа и даље није чиста након горе наведених метода, можете је потопити у разблажену концентровану сумпорну киселину (1:1) 1 до 2 минута, или је прокувати у 1% раствору НаОХ неколико минута, испрати је дестилованом воде неколико пута, а затим ставите у анхидровани дехидрат у етанолу и оставите на страну.
2. Припрема потпорне мембране
Приликом посматрања узорака, носећа мрежа такође треба да буде прекривена слојем неструктурираног, уједначеног филма, у супротном ће мали узорци исцурити из отвора мреже за ношење. Овај филм се обично назива потпорни филм или носећи филм. Потпорни филм треба да буде провидан за електроне, а његова дебљина генерално треба да буде мања од 20 нм; под утицајем електронског снопа, филм такође треба да има одређену механичку чврстоћу за одржавање структурне стабилности и добру топлотну проводљивост; поред тога, мрежа за подршку треба да се користи у електронској микроскопији. Не би требало да постоји видљива структура испод, нема хемијске реакције са узорком који се носи, и нема сметњи у посматрању узорка. Његова дебљина је углавном око 15 нм. Носећи филм може бити пластична фолија (као што је колодијумски филм, полиетилен формалдехидна фолија, итд.), Угљенична фолија или метална фолија (као што је берилијумски филм, итд.). У нормалним условима рада, пластична фолија може испунити захтеве. Међу пластичним фолијама, колодијумски филм је релативно лак за припрему, али његова снага није тако добра као полиетилен формалдехидна фолија.
