Принципи ласерске конфокалне микроскопије (ЛСЦМ)
Ласерски конфокални микроскоп користи отвор за осветљење постављен иза извора светлости и отвор за детекцију постављен испред детектора да би се постигло осветљење тачке и детекција тачке. Светлост из извора светлости је фокусирана на тачку у фокалној равни узорка помоћу светлости која се емитује кроз отвор за осветљење, а флуоресценција емитована из те тачке се снима унутар отвора за детекцију, а свако емитовано светло изван те тачке је блокирано од стране пинхоле за откривање. Рупа за осветљење и рупица за детекцију су коњуговани за осветљену или детектовану тачку, тако да је детектована тачка конфокална тачка, а раван у којој се детектована тачка налази конфокална раван. Рачунар приказује откривену тачку на екрану рачунара у облику тачке слике. Да би произвео потпуну слику, систем за скенирање на оптичкој путањи скенира преко фокалне равни узорка, стварајући тако потпуну конфокалну слику. Све док се степен носача помера горе-доле дуж З-осе, нови ниво узорка се помера у конфокалну раван, а нови ниво узорка се приказује на монитору, док З-оса наставља да се потез, добијају се узастопне светлосне слике различитих нивоа узорка.
Традиционални оптички микроскоп користи извор светлости на пољу, слика сваке тачке на узорку ће бити ометана дифракцијом или расипањем светлости од суседних тачака; конфокални микроскоп за ласерско скенирање користи ласерски сноп кроз осветљени отвор за формирање тачкастог извора светлости на узорку скенираном у свакој тачки унутрашње фокалне равни, узорак на озраченој тачки, сликање отвора за детекцију, детекцијом рупице након што се цев за умножавање светлости (ПМТ) или уређај са хладним електроспојником (цЦЦД) прими тачку по тачку или линију по линију, флуоресцентна слика се брзо формира на екрану монитора рачунара. Рупица за осветљење и рупица за детекцију у односу на жижну раван сочива објектива су коњугирана, тачка на жижној равни је истовремено фокусирана на рупицу за осветљење и емисиону рупицу, тачка изван жижне равни неће бити у детекцији пинхоле на снимању, тако да добијена конфокална слика представља оптички попречни пресек узорка, превазилазећи недостатке нејасне слике обичног микроскопа.
Од основног принципа, ласерски конфокални микроскоп је модеран оптички микроскоп, то је обичан светлосни микроскоп из технологије да направи следећа побољшања.
1. Користите ласер као извор светлости јер је монохроматичност ласера веома добра, таласна дужина снопа извора светлости је иста, што суштински елиминише хроматску аберацију.
2. Употреба конфокалне технологије у фокалној равни објективног сочива постављеног у средини са малом рупом у прегради, фокална раван изван залуталог светла блокира, елиминишући сферну аберацију; и даље елиминишу хроматску аберацију.
3. Ласерски конфокални микроскоп који користи технологију скенирања тачака за разлагање узорка у дводимензионални или тродимензионални простор на безброј тачака, са веома малим ласерским снопом (тачкасти извор светлости) тачку по тачку, линију по линију скенирајући слику, а затим кроз микрокомпјутерска комбинација целе равни или тродимензионалне слике. Традиционални светлосни микроскоп је извор светлости на терену под једнократним снимањем, узорци на свакој тачки слике ће бити у близини тачке дифракције светлости и интерференције расуте светлости. Јасноћа и прецизност ове две слике се не могу поредити.
4. Аквизиција и обрада оптичких сигнала рачунаром и појачање сигнала фотомултипликатором
У ласерском конфокалном микроскопу, рачунар замењује људско око или камеру за посматрање и видео снимање, а добијене слике се дигитализују и могу се обрадити у рачунару како би се поново побољшала јасноћа слика. Штавише, употреба фотомултипликатора може појачати веома слабе сигнале, значајно побољшавајући осетљивост. Као резултат комбиноване употребе наведених технологија, може се рећи да је ЛСЦМ најнапреднији микроскоп на свету. Може се рећи да је ЛСЦМ комбинација технологије производње микроскопа, фотоелектричне технологије, компјутерске технологије**, неизбежан производ развоја савремене технологије.
