Технике бојења и микроскопско посматрање микроорганизама
Једноставно бојење бактерија
1 Циљеви
1.1 Научити основне технике микробног размаза и бојења.
1.2 Савладати једноставну методу бојења бактерија.
1.3 Упознати морфолошке карактеристике бактерија и консолидовати учење употребе уљног огледала и асептичких техника рада.
2 Принцип Размаз и бојење бактерија је основна техника у микробиолошким експериментима. Ћелије бактерија су мале и провидне, није их лако препознати под обичним светлосним микроскопом и морају бити обојене. Употреба једне боје за бојење бактерија, тако да обојени организам и позадина формирају јасну разлику у боји, тако да се њихова морфологија и структура могу јасније уочити. Ова метода је лака за извођење и погодна је за посматрање општег облика организма и распореда бактерија. Алкалне боје се обично користе за једноставно бојење, јер у неутралним, алкалним или слабо киселим растворима, бактеријске ћелије су обично негативно наелектрисане, а када су алкалне боје јонизоване, део за бојење њихових молекула је позитивно наелектрисан, тако да део за бојење алкалних боја може лако да се веже за бактерије да би бактерије обојене. Обојене бактеријске ћелије су у оштром контрасту са позадином и лакше их је препознати под микроскопом. Обично коришћене боје за једноставно бојење укључују мероцианин плаву, кристално љубичасту и црвену базично једињење. Када бактеријска разградња шећера производи киселину тако да се пХ медијума смањује, позитивни набој бактерија се повећава, а затим се може користити у црвеном, киселом црвеном или конго црвеном и другим киселим бојама. Бактерије морају бити фиксиране пре бојења. Његова сврха је двострука: једна је да убије бактерије и учини да се бактерије залепе за стакалце; други је да се повећа његов афинитет према боји. Обично се користе две методе: загревање и хемијска фиксација. Покушајте да одржите оригиналну морфологију ћелија приликом фиксирања.
3 Материјали
3.1 Сој Бациллус субтилис 12-18х хранљива агар култура, Стапхилоцоццус ауреус око 24х хранљива агар култура, Есцхерицхиа цоли 24х хранљива агар култура, коса агар агар пекарског квасца.
3.2 Боја Луе-ова алкална метилен плава боја (или кристално љубичаста боја амонијум оксалата), црвена боја једињења карбонске киселине.
3.3 Инструменти или други прибор Микроскоп, алкохолна лампа, стакалце, инокулациони прстен, држач стакалца, двослојна боца (напуњена кедровим уљем и ксиленом), папир за микроскоп, физиолошки раствор или дестилована вода, итд.
4 Процедура Размазивање → сушење → фиксација → бојење → прање → сушење → микроскопски преглед.
5 корака
5.1 Размаз Узмите два чиста стакалца без уља, сваки са малом капи физиолошког раствора (или дестиловане воде) у средини стакалца у асептичним условима, са инокулационим прстеном да асептички делује, од Бациллус субтилис, Гарциниа мицроцоццус и Есцхерицхиа цоли коси да убереш мало маховине у капи воде, помешаш и обложиш филмом. Ако се бактеријска суспензија (или течна култура) размаже, може се користити за инокулацију 2 до 3 прстена у прстену директно на стакалцу. Имајте на уму да физиолошки раствор (дестилована вода) и узимајте бактерије не би требало да буде превише и да се равномерно шири, не превише густо.
5.2 Сушење Осушите природно на собној температури. Такође се може сушити загревањем мало изнад алкохолне лампе са премазаном страном нагоре. Међутим, немојте се превише приближавати пламену, јер ће превисока температура уништити морфологију бактерија.
5.3 Фиксирање Ако се користи топлотно сушење, фиксација и сушење се комбинују у једном кораку на исти начин као и сушење. Размазати, осушити и загрејати.
5.4 Бојење Ставите стакалцу равно на полицу за стакалце, додајте 1 до 2 капи раствора за бојење на размаз (прикладан је раствор за бојење који само покрива филм за размазивање). Обојите размаз Лу'с Басиц Мелланок Блуе 1~2 мин и карбонат црвеном (или амонијум оксалат кристално љубичастом) око 1 мин.
5.5 Испирање Одлијте раствор за бојење и нежно исперите водом из чесме са једног краја стакалца све док вода која тече из размаза не постане безбојна. Приликом испирања, не дозволите да вода тече директно како бисте опрали обложену површину. Проток воде не би требало да буде пребрз или превелик да би се избегло померање размазаног филма.
5.6 Сушење Отресите капљице воде на стакалцу да се природно осуши, сушите феном или се може користити упијајући папир за апсорпцију сувог (пазите да не обришете тело бактерије). 5.7 Микроскопски преглед Размаз се осуши и прегледа микроскопски. Размаз мора бити потпуно сув пре него што се може посматрати уљним микроскопом.
6 Резултати Нацртајте морфологију Е. цоли и Мицроцоццус гарциниае након једног бојења.
Грам Стаин
1. Сврха
1.1 Разумети принцип бојења по Граму и његов значај у класификацији и идентификацији бактерија.
1.2 Научити и савладати технику бојења по Граму и консолидовати учење употребе уљног сочива светлосног микроскопа.
