Принцип и структурне карактеристике флуоресцентне микроскопије
Флуоресцентна микроскопија користи тачку са високом светлосном ефикасношћу да емитује одређену таласну дужину светлости (као што је ултраљубичасто светло 3650 ин или љубичасто плаво светло 4200 ин) кроз систем за филтрирање боја као ексцитационо светло и побуђује флуоресцентне супстанце у узорку да емитују различите боје флуоресценције. Након тога се посматра кроз увећање сочива објектива и окулара. На овај начин је лако препознати чак и када је флуоресценција веома слаба на јакој позадини, са високом осетљивошћу. Углавном се користи за проучавање структуре и функције ћелије, као и хемијског састава. Основна структура флуоресцентног микроскопа састоји се од обичног оптичког микроскопа плус додатака као што су флуоресцентни извор светлости, ексцитациони филтер, сепаратор дихроичног снопа и филтер за блокирање. Флуоресцентни извори светлости углавном користе живине лампе ултра високог притиска (50-200В), које могу да емитују светлост различитих таласних дужина. Међутим, свака флуоресцентна супстанца има таласну дужину побуђивачке светлости која производи најјачу флуоресценцију, тако да је потребно додати филтере за побуђивање (обично ултраљубичасти, љубичасти, плави и зелени ексцитациони филтери) како би се омогућило само одређеној таласној дужини ексцитационог светла да продре и озрачи у узорак, док апсорбује сву другу светлост. Након што је озрачена ексцитационим светлом, свака супстанца емитује видљиву флуоресценцију дужу од таласне дужине зрачења за врло кратко време. Флуоресценција има специфичност и генерално је слабија од ексцитационе светлости. Да би се посматрала специфична флуоресценција, потребно је додати блокирање (или супресију) иза сочива објектива и користити га у комбинацији.
Разлика између флуоресцентног микроскопа и обичног микроскопа
1. Метода осветљења је обично типа падајућег снопа, при чему се извор светлости пројектује на узорак кроз објектив објектива;
2. Извор светлости је ултраљубичасто светло, са краћом таласном дужином и вишом резолуцијом од обичних микроскопа;
3.Постоје два специјална филтера, онај испред извора светлости се користи за филтрирање видљиве светлости, а онај између окулара и сочива објектива се користи за филтрирање ултраљубичастих зрака ради заштите људског ока.
Флуоресцентна микроскопија је такође врста оптичке микроскопије, са главном разликом у различитим таласним дужинама побуде. Ово одређује разлике у структури и употреби између флуоресцентне микроскопије и обичне оптичке микроскопије.
Флуоресцентна микроскопија је основни алат за имунофлуоресцентну цитохемију. Састоји се од главних компоненти као што су извор светлости, систем филтерских плоча и оптички систем. Користи одређену таласну дужину светлости да потакне узорак да емитује флуоресценцију, и увећава га кроз систем објектива и окулара да би посматрао флуоресцентну слику узорка.
