Сврха, атрибути и употреба флуоресцентног микроскопа
Принцип и структурне карактеристике флуоресцентног микроскопа: флуоресцентни микроскоп користи тачкасти извор светлости са високом светлосном ефикасношћу да емитује одређену таласну дужину светлости (као што је ултраљубичасто светло 3650 ин или љубичасто плаво светло 4200 ин) кроз систем филтера као побуда светлост да стимулише флуоресценцију у узорку. Након што супстанца емитује флуоресценцију различитих боја, она се посматра кроз увећање сочива објектива и окулара. На овај начин, под јаком контрастном позадином, чак и ако је флуоресценција веома слаба, лако се идентификује и има високу осетљивост. Углавном се користи за истраживање структуре и функције ћелије и хемијског састава. Основна структура флуоресцентног микроскопа састоји се од обичног оптичког микроскопа плус неких додатака (као што су флуоресцентни извор светлости, филтер за побуђивање, двобојни разделник зрака и филтер за блокирање, итд.). Флуоресцентни извор светлости—генерално користите живину лампу ултра високог притиска (50-200В), која може да емитује светлост различитих таласних дужина, али свака флуоресцентна супстанца има таласну дужину побуде која производи најјачу флуоресценцију, тако да филтер за побуђивање (Генерално, постоје ултраљубичасти, љубичасти, плави и зелени ексцитациони филтери), који дозвољавају само ексцитационој светлости одређене таласне дужине да прође и озрачи узорак, док апсорбује другу светлост. Након што је свака супстанца озрачена ексцитационим светлом, емитује видљиву флуоресценцију са већом таласном дужином од таласне дужине зрачења за врло кратко време. Флуоресценција је специфична и генерално слабија од ексцитационе светлости. Да би се посматрала специфична флуоресценција, потребан је филтер за блокирање (или потискивање) иза сочива објектива.
Има две функције: једна је да апсорбује и блокира ексцитационо светло да уђе у окулар, како не би пореметио флуоресценцију и оштетио очи; други је одабрати и пустити да специфична флуоресценција прође, показујући специфичну флуоресцентну боју. Два филтера се морају користити заједно.
Постоје две врсте флуоресцентних микроскопа у смислу њихових оптичких путања:
1. Трансмисиони флуоресцентни микроскоп: Ексцитациони извор светлости се пропушта кроз материјал узорка кроз кондензаторско сочиво да би побудио флуоресценцију. Обично се користи колектор тамног поља, а обичан колектор се такође може користити за подешавање огледала тако да се побудна светлост преусмери и заобиђе на узорак. Ово је старији флуоресцентни микроскоп. Предност је што је флуоресценција јака при малом увећању, али недостатак је што се флуоресценција смањује са повећањем увећања. Због тога је боље посматрати веће материјале узорака.
2. Епи-флуоресцентни микроскоп је нова врста флуоресцентног микроскопа развијена у модерно доба. Разлика је у томе што побудна светлост пада са сочива објектива на површину узорка, односно, исто сочиво објектива се користи као кондензатор осветљења и сочиво објектива за прикупљање флуоресценције. Дихроични разделник снопа треба додати у путању светлости, која је удаљена 45 степени од лаког уранијума. Побуђена светлост се рефлектује у сочиво објектива и сакупља на узорку. Флуоресценција коју генерише узорак и побудна светлост рефлектована од површине сочива сочива објектива и површине поклопца стакла улазе у сочиво објектива у исто време и враћају се у двобојни разделник снопа да би побудна светлост била одвојена од флуоресценције , преостала побудна светлост се апсорбује блокирајућим филтерима. Као што је промена на комбинацију различитих ексцитационих филтера / двобојног разделника зрака / филтера за блокирање, може задовољити потребе различитих производа флуоресцентне реакције. Предност ове врсте флуоресцентног микроскопа је у томе што је осветљење видног поља уједначено, слика јасна, а што је веће увећање, то је флуоресценција јача.
(2) Како се користи флуоресцентни микроскоп.
1. Укључите извор светлости и живина лампа ултра високог притиска треба да се загреје неколико минута да би дошла до најсветлије тачке.
2. Трансмисиони флуоресцентни микроскоп треба да инсталира потребан филтер за побуђивање између извора светлости и кондензатора и да инсталира одговарајући филтер за блокирање иза сочива објектива. Епи-флуоресцентни микроскопи треба да уметну уметке захтеваног ексцитационог филтера/двобојног разделника зрака/филтера за блокирање у прорезе на оптичкој путањи.
3. Посматрајте сочивом са малим увећањем и подесите центар извора светлости тако да се налази у центру целе тачке осветљења према уређају за подешавање различитих модела флуоресцентних микроскопа.
4. Поставите узорак и посматрајте након фокусирања. Током употребе треба обратити пажњу: не посматрајте директно крајњим филтером, како не бисте оштетили очи; када посматрате узорке са уљним сочивом, морате користити посебно уљно сочиво без флуоресценције; након што се живина лампа високог притиска искључи, не може се одмах поново укључити, потребно је тестирати. Може се поново покренути након 5 минута, иначе ће бити нестабилан и утицати на живот живине лампе.
(3) Посматрање Коришћењем плаво-љубичастог светлосног филтера под флуоресцентним микроскопом на наставној платформи, може се видети да је о. 01 проценат ћелија обојених акридин наранџастом флуоресцентном бојом, језгро и цитоплазма су узбуђени да производе две различите боје флуоресценције (тамно зелена и наранџасто црвена).
