Коришћење флуоресцентне микроскопије: технике и вештине
Технички параметри флуоресцентног микроскопа 1. Широкоугаони окулар 2. Ахроматична сочива објектива 3. Конвертор сочива објектива са четири отвора 4. Епифлуоресцентни уређај Плава (Б) Зелена (Г) побуда 100В живина лампа 5. Механизам за подешавање коаксијалног грубог и финог фокуса: подешавање Опсег фокуса: 15 мм Вредност микропомерања мреже: 0,002 мм 6. Двослојни механички сто Опсег уздужног кретања: 70 мм Опсег бочног кретања: 50 мм
Користите метод вештине
(1) Стаклени тобоган
Дебљина стакала треба да буде између 0,8 и 1,2мм. Предебео клизач ће апсорбовати више светлости с једне стране, а са друге стране, побудна светлост не може да се концентрише на узорак. Слајдови морају бити глатки, уједначене дебљине и без очигледне аутофлуоресценције. Понекад се користе слајдови од кварцног стакла.
(2) Поклопно стакло
Дебљина покривног стакла је око 0.17 мм, глатко. Да би се појачало ексцитационо светло, може се користити и интерферентно покривно стакло, које је специјално покривно стакло обложено са неколико слојева супстанци (као што је магнезијум флуорид) које имају различите ефекте интерференције на светлост различитих таласних дужина, што може учинити флуоресценција иде глатко. Узбудљива светлост пролази кроз и рефлектује се, а ова рефлектована побудна светлост побуђује узорак.
(3) Примерак
Кришке ткива или други узорци не би требало да буду превише дебели. Ако је превише дебео, највећи део ексцитационе светлости ће се потрошити у доњем делу узорка, док горњи део који директно посматра сочиво објектива неће бити у потпуности узбуђен. Поред тога, преклапање ћелија или покривање нечистоћа, утичу на процену.
(4) Средство за монтажу
Глицерин се обично користи као агенс за монтажу, који не сме да има аутофлуоресценцију, безбојан је и провидан, а осветљеност флуоресценције је светлија при пХ 8.5-9.5 и није лако брзо да избледи. Због тога се као средство за монтажу обично користи једнака мешавина глицерола и 0.5мол/л раствора карбонатног пуфера са пХ од 90 до 9,5.
(5) уље за огледало
Генерално, када се посматрају узорци флуоресцентним микроскопима тамног поља и уљним сочивима, мора се користити уље за потапање. Најбоље је користити специјално нефлуоресцентно уље за потапање. Уместо тога се може користити и горњи глицерин, а може се користити и течни парафин, али је индекс преламања низак, што има благи утицај на квалитет слике. Утицај.
