Који су захтеви за узорке за светлосну микроскопију?
У процесу припреме узорка оптичког микроскопа, дебљина пресека узорка је између 2 и 25 ум; дебљина пресека електронског микроскопа је унутар 50-100нм (осим високонапонског електронског микроскопа, дебљина узорка може да достигне 1ум), тако да коришћени метод сечења није исти.
У погледу носача, носилац секције оптичког микроскопа је стакло, а носач секције електронског микроскопа је мрежа носача.
У погледу фиксације, делови оптичког микроскопа се фиксирају сложеним фиксатором, док се пресеци електронског микроскопа више пута фиксирају једним фиксатором
Што се тиче бојења, бојење оптичких узорака је релативно једноставно. Према различитим узорцима посматрања и типу оптичког микроскопа, обично је довољно користити неке фиксне мрље. Постоји много метода за поновно бојење узорака електронског микроскопа, а такође су веома компликоване, као што су негативно бојење, бојење сребром и тако даље.
У погледу уградње, парафин, колодион, желатин, итд. се користе као средства за уградњу за пресеке оптичког микроскопа; епоксидна смола, полистиренска смола, изобутиленска смола и смола растворљива у води се користе као средства за уградњу пресека електронског микроскопа.
Да би видно поље микроскопа добило уједначено и довољно осветљење, неопходно је подесити систем оптичке путање осветљења када се микроскоп први пут инсталира и отклања грешке. захтевима. Поред тога, правилно схватање подешавања оптичког система путање осветљења је неопходан корак након замене сијалице у процесу коришћења микроскопа, а такође је неопходно средство за тестирање перформанси микроскопа с времена на време у свакодневни процес употребе. Подешавање оптичког система осветљења микроскопа углавном укључује следеће 4 ставке: 1. Прелиминарно подешавање коморе лампе извора осветљења ван микроскопа ① Прво отворите кућиште коморе лампе и ставите халогену сијалицу у грло притиском на опружни клип. Прљавштина попут отисака прстију на сијалици ће утицати на животни век сијалице. ②Поставите просторију за лампу на сто, након што укључите напајање, помоћу специјалног шрафцигера подесите отвор дугмета за фокусирање на лампи (означен са „←→“), тако да се филамент пројектује на зид 1-2 м, а слика филамента је подешена. Затим подесите висину лампе да бисте подесили отвор за жаруљу (означен са "──") како би положај жарне нити био одговарајући; затим подесите отворе за завртње за подешавање леве и десне позиције лампе (означене са "──") да би леви и десни положај жарилне нити био одговарајући.
2. Сврха прегледа и корекције положаја осветљивача (филамента) извора светлости у микроскопу је да се крај слике осветљивача подеси у видно поље сочива објектива и да се обезбеди да видно поље микроскопа је у потпуности и уједначено примљено из перспективе извора светлости. Осветљење, што је предуслов за подешавање Кухлер система осветљења. Потребан основни алат: Телескопи за центрирање су опремљени микроскопом. ① Одспојите кућиште од матираног стакла из кућишта лампе и вратите кућиште лампе на микроскоп ② Изаберите сочиво објектива од 10×, укључите програм извора светлости да бисте пронашли узорак и јасно подесили фокус, а затим користите објектив од 40× сочиво за јасно фокусирање узорка (40× објектив објектива Цела слика филамента се може јасно видети); ③ Отворите и отвор бленде и дијафрагму поља кондензатора до максимума; ④ Искључите један од окулара, замените га телескопом за центрирање, зграбите бели део и продужите црни окулар другом руком. Слика филамента се може видети у видном пољу; ⑤Ако положај филамента није прикладан, подесите рупу "──", подесите слику филамента у хоризонталном смеру, подесите отвор "──" и подесите слику филамента у вертикалном смеру док не подесите слику филамента на кружни слика која само испуњава отвор сочива објектива; ⑥ Након подешавања, вратите навлаку од матираног стакла у првобитни положај, искључите телескоп за центрирање и замените окулар за следеће подешавање. Горе поменуто подешавање осветљења просторије лампе извора светлости ван микроскопа и калибрација положаја осветљивача извора светлости унутар микроскопа треба да се изврши само када је микроскоп инсталиран и отклоњен по први пут и када је сијалица замењени. У случају забуне, можете га вратити у првобитно стање према горе наведеним корацима.
3. Правилно подешавање система Кохлер осветљења (Кохлер) Исправно подешавање микроскопа, један од главних задатака је подешавање система путање осветљења, а кључно је подешавање Кохлер система осветљења. За све који користе микроскопе, посебно оне који снимају микроскоп, требало би да имају извесно разумевање и владање принципа Кухлер система осветљења и његових корака прилагођавања, тако да могу у потпуности да играју функције микроскопа. Добијене фотографије могу бити доследније и савршеније у ефекту. Принцип Кухлеровог система осветљења је једноставан: светлост коју емитује било која тачка на осветљивачу извора светлости може да осветли видно поље микроскопа, а светлост коју емитује свака тачка на осветљивачу извора светлости се сакупља и налази се у видно поље микроскопа. Постиже се веома довољно и уједначено осветљење. Сврха подешавања Кухлеровог система осветљења је да се добије уједначено и довољно осветљење за посматрано видно поље, и да се спречи да залутало светло утиче или омета систем за снимање, како би се избегло стварање магле на негативу током фотографисања. Основне компоненте Кухлер система осветљења са високим подешавањем: дијафрагма поља, систем кондензатора са подешавањем по оси. ① Изаберите 10× сочиво објектива и 10× окулар ② Ставите предње сочиво кондензатора у оптичку путању, подесите дијафрагму бленде на умерени положај (не превелики или не премали), а затим подигните кондензатор у горњу позицију, и подесите окретну плочу кондензатора на позицију Бригхт фиелд "Ј" ③ Подесите дијафрагму поља на минимум (0,1)
④ Ставите затворени биолошки узорак на бину, укључите извор светлости и јасно фокусирајте
⑤ У видном пољу ће се појавити локално осветљено подручје или светла тачка, што је замућена слика дијафрагме поља, на којој се јасно могу видети детаљи узорка; Јасно погледајте детаље узорка
⑥ Благо спустите кондензатор, тако да се светла тачка у видном пољу постепено сужава и постепено постаје јасна полигонална слика, што је јасна слика дијафрагме поља;
⑦ У нормалним околностима, полигонална слика није у центру видног поља. Потребно је подесити пар шрафова за центрирање кондензатора да би се полигонална слика видног поља подесила на средишњи положај;
⑧ Постепено отварајте дијафрагму видног поља да би полигонална слика постала уписани полигон видног поља и даље проверите стање поравнања. Ако поравнање није идеално, наставите да лагано подешавате шраф за поравнање;
⑨ Благо отворите дијафрагму поља да би полигонална слика нестала на ивици видног поља. У овом тренутку, подешавање Кухлер система осветљења је завршено. Након подешавања Кухлеровог система осветљења, цело видно поље је осветљено равномерно, а микроснимци су били светли и јасни са нормалним контрастом.
